基于單抗特異性的2-甲氧基雌二醇白蛋白納米粒的初步研究.pdf

1、腫瘤的靶向治療是目前研究的熱門領(lǐng)域之一，本課題旨在建立一種高度精準的靶向給藥系統(tǒng) HER2-2-ME-BSANPs，即以牛血清白蛋白（BSA）為載體，抗 HER2單克隆抗體為靶頭，將“彈頭”藥物2-甲氧基雌二醇遞送至特定腫瘤部位，增加藥物在腫瘤部位的蓄積及攝取，緩慢釋放藥物，有效提高其抗腫瘤效果，減小藥物的毒副作用。本課題主要研究內(nèi)容可分為三個部分：
　　第一部分，HER2-2-ME-BSANPs的制備及相關(guān)制劑學表征。
　

2、　采用去溶劑化法制備2-甲氧基雌二醇白蛋白納米粒（2-ME-BSANPs），再利用異型雙功能交聯(lián)劑SPDP將抗HER2單抗與2-ME-BSANPs進行偶聯(lián)反應，制備抗人乳腺癌特異性納米粒HER2-2-ME-BSANPs。通過SDS-PAGE電泳、凝集試驗和免疫熒光實驗，證實抗HER2單抗與2-ME-BSANPs偶聯(lián)成功，該給藥系統(tǒng)具有高度免疫活性及特異性；DTT法檢測抗 HER2單抗與2-ME-BSANPs偶聯(lián)比為36.28％，可實現(xiàn)高

3、效靶向作用；HER2-2-ME-BSANPs平均粒徑和電位分別為（221.5±2.1） nm和（-25.59±0.69） mV，納米粒大小均勻、穩(wěn)定；HPLC檢測 HER2-2-ME-BSANPs的包封率與載藥量分別為（89.15±3.80）%和（8.31±2.50）%，增加了2-ME的溶解性、提高了其生物利用度；制劑HER2-2-ME-BSANPs的體外釋藥結(jié)果表明，相比于2-ME原料藥，HER2-2-ME-BSANPs具有緩釋性，延

4、長了2-ME的半衰期。
　　第二部分，HER2-2-ME-BSANPs的體外細胞毒性及靶向性研究。
　　以人乳腺癌細胞SK-BR-3（HER2受體陽性表達，HER2+）和MCF-7（HER2受體陰性表達，HER2-）為模型細胞，考察HER2-2-ME-BSANPs的體外抗腫瘤活性及靶向性。MTT結(jié)果顯示HER2-2-ME-BSANPs對SK-BR-3細胞的抑制作用高于MCF-7細胞，且對該兩種腫瘤細胞的抑制均呈現(xiàn)濃度與時間依

5、賴性，與游離藥物相比，抗腫瘤藥效具有顯著性差異；細胞攝取結(jié)果表明HER2-2-ME-BSANPs在抗HER2單抗的介導作用下，可快速、高效進入HER2受體陽性表達的腫瘤細胞內(nèi)部；細胞周期結(jié)果顯示HER2-2-ME-BSANPs將兩種腫瘤細胞均阻滯于G2/M期，具有細胞周期阻滯作用，且未改變2-ME的阻滯周期；細胞凋亡及自噬結(jié)果證明HER2-2-ME-BSANPs可通過誘導細胞凋亡及細胞自噬對 SK-BR-3細胞和MCF-7細胞的增殖產(chǎn)生

6、抑制作用。靶向給藥系統(tǒng)HER2-2-ME-BSANPs可將藥物精準、高效地導向于特定腫瘤細胞，在體外具有良好的抗腫瘤活性及靶向性。
　　第三部分，HER2-2-ME-BSANPs的藥代動力學、藥效學及體內(nèi)靶向性研究。
　　以SD大鼠為動物模型，研究靶向制劑HER2-2-ME-BSANPs體內(nèi)藥動學特征。結(jié)果顯示，相比于2-ME原料藥，HER2-2-ME-BSANPs在體內(nèi)的消除半衰期及平均滯留時間顯著延長，藥物的血漿清除速率

7、減小，AUC明顯增加，表明靶向制劑HER2-2-ME-BSANPs具有緩釋性，使藥物在腫瘤部位緩慢釋放，延長有效藥物濃度時間，持久發(fā)揮腫瘤治療作用，同時可改善藥物2-ME生物利用度低及半衰期短等缺點。
　　選用BALB/c裸鼠為模型動物，人乳腺癌細胞SK-BR-3（HER2+）和MCF-7（HER2-）細胞為模型細胞，構(gòu)建荷瘤鼠模型。采用經(jīng)典藥理學方法考察HER2-2-ME-BSANPs的體內(nèi)抗腫瘤活性，結(jié)果顯示 HER2-2-M

8、E-BSANPs對HER2受體陽性表達的乳腺癌抑制效果明顯優(yōu)于HER2受體陰性表達的乳腺癌，表明相比2-ME和2-ME-BSANPs，HER2-2-ME-BSANPs在體內(nèi)具有高效的抗腫瘤活性。同時，采用活體成像技術(shù)和熒光染料 DIR標記該給藥系統(tǒng)，觀察其在小鼠體內(nèi)各組織的分布特征，并解剖出各臟器，拍照，觀察藥物載體的腫瘤靶向特征，結(jié)果顯示該靶向給藥系統(tǒng)在 HER2受體陽性表達的乳腺癌的熒光信號強于 HER2受體陰性表達的乳腺癌，且其在