新型2-甲氧基雌二醇衍生物抗腫瘤血管生成活性的研究.pdf

1、目的
　　研究2-ME及其衍生物的抗血管生成作用，從衍生物中，篩選具有抗血管生成活性好，并且毒性小的新型化合物，為臨床上治療癌癥聯(lián)合輔助用藥提供研究依據(jù)。
　　方法
　　1.利用體內(nèi)抗血管生成模型雞胚尿囊膜法，篩選2-ME衍生物；
　　2.采用MTT法檢測(cè)篩選出的化合物GHY對(duì)多種細(xì)胞的細(xì)胞毒作用；
　　3.采用劃痕實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)化合物GHY在體外對(duì)HUVEC和MCF-7細(xì)胞的遷移的影響；
　　4.運(yùn)用T

2、ranswell小室遷移實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)化合物GHY對(duì)HUVEC和MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲的影響；
　　5.采用Western blot法考察相關(guān)蛋白，確定化合物GHY抑制遷移侵襲作用的分子機(jī)制；
　　6.利用裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)，考察化合物體內(nèi)抗腫瘤活性的研究，并檢測(cè)血清中與肝功能相關(guān)的酶以及對(duì)內(nèi)臟組織HE染色，評(píng)價(jià)化合物毒性。
　　結(jié)果
　　1.雞胚尿囊膜實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，衍生物中GHY等化合物在血管數(shù)及血管面積上與對(duì)照組

3、比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.用2-ME和化合物GHY分別處理HUVEC細(xì)胞、GES細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、MGC-803細(xì)胞、PC-3細(xì)胞48h和72h，MTT結(jié)果顯示，2-ME對(duì)多種細(xì)胞均有細(xì)胞毒作用，而化合物GHY則未表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒作用，其中GHY對(duì)HUVEC細(xì)胞72h的IC50為66μM，而2-ME的72hIC50為2.11μM。
　　3.對(duì)HUVEC細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)

4、果顯示，化合物GHY可以顯著抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　4. Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVEC細(xì)胞中有關(guān)蛋白的表達(dá)，包括VEGF-R、FAK、p-FAK、和SHC等?；衔颎HY處理后，VEGF-R的蛋白表達(dá)下降，相應(yīng)的SHC蛋白也減少，而FAK總蛋白不變，但FAK的活性形式p-FAK表達(dá)下調(diào)，最終抑制內(nèi)皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。對(duì)蛋白表達(dá)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與對(duì)照組比較，GHY組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

5、
　　5. MCF-7細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物GHY可以顯著抑制腫瘤細(xì)胞的遷移，并且呈濃度依賴(lài)性，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　6.在MCF-7細(xì)胞上，Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)有關(guān)EMT標(biāo)志蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，化合物GHY處理后，可以上調(diào)上皮表型標(biāo)志物ZO-1和E-Cadherin蛋白的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)間充質(zhì)標(biāo)志物N-Cadherin和Vimentin蛋白的表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、分析蛋白量的表達(dá)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。說(shuō)明化合物 GHY抑制MCF-7細(xì)胞遷移的機(jī)制可能通過(guò)抑制EMT過(guò)程。
　　7. MCF-7細(xì)胞的裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，化合物GHY高劑量組可以抑制腫瘤體積和瘤重的增加，與對(duì)照組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明，化合物GHY具有較好的體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。
　　8.通過(guò)生化學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)肝臟毒性以及各臟器的 HE染色的病理切片結(jié)果表明，化合物GHY對(duì)ALT和ALP的值沒(méi)有顯著影響，

7、而陽(yáng)性對(duì)照5-FU組則表現(xiàn)一定的肝毒性。對(duì) AST的值，與對(duì)照組比較，有一些影響，但是都屬于正常值范圍內(nèi)。內(nèi)臟HE染色的病理表明，化合物GHY對(duì)內(nèi)臟組織無(wú)明顯可見(jiàn)的損害。因此，化合物GHY在體內(nèi)也不表現(xiàn)明顯毒性。
　　結(jié)論
　　綜上所述，2-ME衍生物GHY可以明顯的抑制體內(nèi)血管的新生，并且具有較低的細(xì)胞毒作用，GHY可以顯著的抑制 HUVEC細(xì)胞的遷移，抑制 HUVEC細(xì)胞的遷移的機(jī)制可能是通過(guò)抑制 VEGFR通路中相關(guān)轉(zhuǎn)