新型2-甲氧基雌二醇衍生物抗腫瘤血管生成活性的研究.pdf

1、目的
　　研究2-ME及其衍生物的抗血管生成作用，從衍生物中，篩選具有抗血管生成活性好，并且毒性小的新型化合物，為臨床上治療癌癥聯(lián)合輔助用藥提供研究依據(jù)。
　　方法
　　1.利用體內抗血管生成模型雞胚尿囊膜法，篩選2-ME衍生物；
　　2.采用MTT法檢測篩選出的化合物GHY對多種細胞的細胞毒作用；
　　3.采用劃痕實驗，檢測化合物GHY在體外對HUVEC和MCF-7細胞的遷移的影響；
　　4.運用T

2、ranswell小室遷移實驗，檢測化合物GHY對HUVEC和MCF-7細胞的遷移和侵襲的影響；
　　5.采用Western blot法考察相關蛋白，確定化合物GHY抑制遷移侵襲作用的分子機制；
　　6.利用裸鼠移植瘤實驗，考察化合物體內抗腫瘤活性的研究，并檢測血清中與肝功能相關的酶以及對內臟組織HE染色，評價化合物毒性。
　　結果
　　1.雞胚尿囊膜實驗結果顯示，衍生物中GHY等化合物在血管數(shù)及血管面積上與對照組

3、比較，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　2.用2-ME和化合物GHY分別處理HUVEC細胞、GES細胞、MCF-7細胞、MGC-803細胞、PC-3細胞48h和72h，MTT結果顯示，2-ME對多種細胞均有細胞毒作用，而化合物GHY則未表現(xiàn)出明顯的細胞毒作用，其中GHY對HUVEC細胞72h的IC50為66μM，而2-ME的72hIC50為2.11μM。
　　3.對HUVEC細胞劃痕實驗和Transwell小室遷移實驗結

4、果顯示，化合物GHY可以顯著抑制血管內皮細胞的遷移，結果具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　4. Western blot實驗檢測HUVEC細胞中有關蛋白的表達，包括VEGF-R、FAK、p-FAK、和SHC等?；衔颎HY處理后，VEGF-R的蛋白表達下降，相應的SHC蛋白也減少，而FAK總蛋白不變，但FAK的活性形式p-FAK表達下調，最終抑制內皮細胞的轉移。對蛋白表達量進行統(tǒng)計學分析，與對照組比較，GHY組具有統(tǒng)計學差異。

5、
　　5. MCF-7細胞劃痕實驗和Transwell小室遷移實驗結果顯示，化合物GHY可以顯著抑制腫瘤細胞的遷移，并且呈濃度依賴性，結果具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　6.在MCF-7細胞上，Western blot實驗檢測有關EMT標志蛋白的表達，結果顯示，化合物GHY處理后，可以上調上皮表型標志物ZO-1和E-Cadherin蛋白的表達，同時下調間充質標志物N-Cadherin和Vimentin蛋白的表達。統(tǒng)計學

6、分析蛋白量的表達，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。說明化合物 GHY抑制MCF-7細胞遷移的機制可能通過抑制EMT過程。
　　7. MCF-7細胞的裸鼠移植瘤實驗結果顯示，化合物GHY高劑量組可以抑制腫瘤體積和瘤重的增加，與對照組比較，具有統(tǒng)計學差異。表明，化合物GHY具有較好的體內抑制腫瘤生長的作用。
　　8.通過生化學實驗評價肝臟毒性以及各臟器的 HE染色的病理切片結果表明，化合物GHY對ALT和ALP的值沒有顯著影響，

7、而陽性對照5-FU組則表現(xiàn)一定的肝毒性。對 AST的值，與對照組比較，有一些影響，但是都屬于正常值范圍內。內臟HE染色的病理表明，化合物GHY對內臟組織無明顯可見的損害。因此，化合物GHY在體內也不表現(xiàn)明顯毒性。
　　結論
　　綜上所述，2-ME衍生物GHY可以明顯的抑制體內血管的新生，并且具有較低的細胞毒作用，GHY可以顯著的抑制 HUVEC細胞的遷移，抑制 HUVEC細胞的遷移的機制可能是通過抑制 VEGFR通路中相關轉