腦不對稱BALB-c小鼠天敵應激后血漿皮質酮和TNF-α的變化研究.pdf

1、背景與目的：
　　腦不對稱是一個廣泛存在的生物學現象,主要表現在大腦左右兩半球在解剖結構和生理功能上的異質性。通過動物實驗以及臨床觀察發(fā)現,大腦左右兩半球對免疫功能具有相反的調節(jié)作用,而且,動物及人類行為不對稱與免疫系統(tǒng)間也存在密切的關系。采用伸爪取食的方法來區(qū)分小鼠的利爪性是人們普遍接受的區(qū)分小鼠腦不對稱性的模型,通過該模型可以將小鼠分為:左利鼠、右利鼠和雙利鼠。新近的研究表明腦不對稱可影響細胞因子的產生,例如TNF-α。過去的

2、研究結果表明,天敵應激后左利鼠的血漿IL-1β水平顯著高于右利鼠。但是,目前人們對腦不對稱小鼠在天敵應激后機體內(Hypothalamic-Pituitary-Adrenocortical Axis,HPA)相關的激素和細胞因子的變化情況了解的還不是很多。為此,本文在前人工作的基礎上開展了如下的研究:
　　1.探討急性天敵應激和慢性天敵應激對腦不對稱小鼠血漿皮質酮和TNF-α濃度的影響以及與機體免疫的關系。
　　2.探討急性

3、天敵應激后腦不對稱小鼠血漿皮質酮和TNF-α濃度的動態(tài)變化。
　　3.探討急性天敵應激和慢性天敵應激對腦不對稱小鼠左右側海馬及肝臟中糖皮質激素受體基因水平和蛋白水平表達的變化情況及與腦不對稱的關系。
　　材料和方法:
　　健康雌性BALB/c小鼠101只,運用伸爪取食法按伸爪50次中伸右爪的次數給每只小鼠評分,將小鼠分為左利鼠、右利鼠和雙利鼠3組。區(qū)分利爪性1w后將左利組和右利組小鼠再分為正常生理組、急性應激組和慢性應

4、激組。急性應激組給予單次60min的天敵應激,應激之后分別于0hr,2hr,6hr,12hr處死小鼠并收集樣本,慢性應激組連續(xù)14d每天給予60min的天敵應激,應激結束后立即處死收集樣本。應激實驗于上午9:00-11:00進行。小鼠處死之后,用放置于冰上已抗凝的離心管收集血液,離心后取血漿用于檢測血漿皮質酮和TNF-α含量(ELISA法);另外,在冰上迅速分離出左右側大腦皮層、左右雙側海馬、下丘腦以及肝臟,取部分組織用TRIzol?法

5、提取總RNA,另外取組織用RIPA裂解法提取總蛋白。提取的RNA經逆轉錄合成cDNA后用Real-TimePCR定量檢測糖皮質激素受體(Glucocorticoids Receptor,GR)mRNA的水平。提取的總蛋白用Western blot檢測GR的蛋白水平。
　　結果：和結論:
　　1.腦不對稱小鼠血漿皮質酮水平:正常生理狀況下,左利、右利鼠皮質酮水平較低;水平相近;慢性應激后,血漿皮質酮水平右利鼠與對照組相比具有顯

6、著性升高(P<0.05)。急性應激0h,2h,6h,12h后小鼠血漿中CS水平與正常對照組相比無統(tǒng)計學差異。
　　2.腦不對稱小鼠血漿TNF-α水平:正常生理狀況下,左利、右利鼠TNF-α水平較低,水平相近;急性應激后,兩組水平均顯著升高(P<0.05),而且左利鼠TNF-α水平顯著高于右利鼠(P<0.05)。急性應激后6hr血漿TNF-α達到分泌高峰,此后呈回落趨勢。慢性應激后,左利鼠和右利鼠血漿TNF-α水平相對于急性應激組和

7、正常組都有顯著性升高(P<0.05)。
　　3.正常生理狀況下左利鼠左側海馬GRmRNA表達水平顯著高于右利鼠左側海馬P<0.05),左利鼠右側海馬GRmRNA水平顯著高于右利鼠右側海馬(P<0.05)。無論是左側海馬區(qū)還是右側海馬區(qū)左利鼠在急性應激和慢性應激之后GRmRNA都出現了顯著性地下調(P<0.05)。
　　4.正常生理狀況下左利鼠和右利鼠肝臟中GRmRNA表達都比較高,水平相近。急性應激后都出現了顯著性下調(P<

8、0.05)。相對于正常生理組,慢性應激后,左利鼠和右利鼠肝臟中GRmRNA表達都顯著性下調(P<0.05),但是相對于急性應激組則沒有顯著性變化。
　　5.正常生理狀況下左利鼠和右利鼠左右兩側海馬中GR蛋白表達都比較高,水平相近。急性應激后左利鼠左側海馬、左利鼠和右利鼠的右側海馬中GR蛋白表達均顯著下調(P<0.05)。慢性應激后,左利鼠雙側海馬和右利鼠雙側海馬中GR蛋白都顯著性下調(P<0.05),相對于急性應激,左利鼠右側海馬