廣州管圓線蟲感染BALB-c小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞亞群和血清抗體的變化.pdf

1、廣州管圓線蟲作為一種新發(fā)傳染病的病原，主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起嗜酸性粒細(xì)胞增多性腦膜腦炎或腦膜炎(Eosinophilic Meningoencephalitis，EM)。廣州管圓線蟲病主要流行于太平洋、印度洋某些島嶼和東南亞、中國、日本等國家；到目前為止，全世界已有超過3000例報(bào)道。了解廣州管圓線蟲感染后產(chǎn)生的免疫應(yīng)答及與宿主相互作用，對于我們了解宿主抗損害作用的特點(diǎn)、蟲體的致病機(jī)制和免疫學(xué)診斷等有重要意義。但由于目前對于廣州管圓

2、線蟲感染的基礎(chǔ)免疫學(xué)研究很少，使醫(yī)學(xué)界對宿主免疫應(yīng)答機(jī)制和特點(diǎn)的了解非常有限。嚴(yán)重制約了廣州管圓線蟲防治研究工作的深入開展。而脾臟是哺乳動物最大的外周免疫器官和血源性抗原最主要的免疫應(yīng)答場所，也是包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)許多免疫細(xì)胞定居區(qū)域。感染后脾臟淋巴細(xì)胞學(xué)的改變能較好地反映宿主對寄生蟲免疫應(yīng)答的特點(diǎn)，因此，本研究以 BALB/c小鼠為動物模型，采用流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等方法對其感染廣州管圓線蟲后脾臟 T淋巴細(xì)胞亞群及

3、血清抗體水平的變化進(jìn)行了觀察。
　　研究目的:
　　觀察小鼠感染廣州管圓線蟲后脾臟T淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子變化特點(diǎn)以及血清中特異性IgG、IgE抗體水平的動態(tài)變化。
　　研究方法：
　　1、模型建立：將30只BALB/c小鼠隨機(jī)分成對照組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組，每組各10只鼠。從感染的褐云瑪瑙螺分離廣州管圓線蟲第3期幼蟲，經(jīng)腹腔注射感染小鼠，實(shí)驗(yàn)1組感染20條幼蟲/鼠、實(shí)驗(yàn)2組感染40條幼蟲/鼠。
　　2、采

4、樣和取材：分別經(jīng)尾靜脈或眼球采集感染前和感染后不同時(shí)間小鼠血液，經(jīng)離心后收集血清。于感染后第19d及第25d前后分批剖殺(處死)小鼠，分離脾細(xì)胞，制備脾細(xì)胞懸液。經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將制備的脾細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為2×106/ml。
　　3、脾細(xì)胞流式檢測：取脾細(xì)胞懸液1ml，加入PMA及離子霉素(Ionomycin)于37℃，5％二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)1h，加入BFA后繼續(xù)培養(yǎng)4h-5h，培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)洗滌后加4%甲醛固定，加含通透劑Sapo

5、nin的緩沖液，4℃過夜。將細(xì)胞分裝入流式管中，加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記單克隆抗體。流式細(xì)胞儀檢測小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞及其亞類的含量。
　　4、脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子檢測：取脾臟細(xì)胞懸液1ml，加入PMA及離子霉素，分別加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，于37℃，5%二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)72 h后取出并保存于-80℃。雙抗夾心ELISA法檢測脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4和IL-17水平。
　　5、血清特異性抗體檢測：用廣州管圓線蟲成蟲抗原包

6、被96孔ELISA板，用間接ELISA法檢測小鼠未感染和感染后不同時(shí)間血清中特異性IgG和IgE的水平并觀察其動態(tài)變化。
　　研究結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)感染組小鼠脾臟CD4+T淋巴細(xì)胞比例較對照組明顯升高，CD8+T淋巴細(xì)胞比例在感染后雖有升高，但與對照組差異不顯著。
　　2、與對照組比較，實(shí)驗(yàn)感染組小鼠CD4+IL-4+T細(xì)胞比例顯著上升，而CD4+IL-17+、CD4+IFN-γ+T細(xì)胞比例明顯下降。
　　3、

7、與對照組比較，實(shí)驗(yàn)感染組脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4水平明顯升高，而IL-17水平則明顯下降。
　　4、感染后上調(diào)性免疫因子包括CD4+、CD8+、CD4+IL-4+T細(xì)胞和細(xì)胞因子IL-4水平均隨著感染程度的增加而上升，而下調(diào)性免疫因子包括CD4+IFN-γ+T細(xì)胞和細(xì)胞因子IL-17檢測值則隨著感染程度的增加而下降，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、小鼠血清中特異性IgG抗體水平于感染后第5d時(shí)已開始小幅度升高，且隨時(shí)

8、間的推移，在波動變化中水平逐漸上升，在感染后第20d前后達(dá)到第一個(gè)高峰。
　　6、小鼠感染后血清中特異性IgE抗體水平較未感染有所上升，且在感染后第10~15d期間抗體水平達(dá)一峰值。
　　結(jié)論：
　　1、BALB/c小鼠感染廣州管圓線蟲后，脾臟T淋巴細(xì)胞出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，其中CD4+T淋巴細(xì)胞增殖較CD8+T淋巴細(xì)胞更為顯著。
　　2、感染廣州管圓線蟲后，小鼠脾臟CD4+IL-4+T淋巴細(xì)胞比例顯著上升，而CD4+I

9、L-17+、CD4+IFN-γ+T淋巴細(xì)胞比例明顯下降。
　　3、感染小鼠脾細(xì)胞在刺激劑作用下培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-4水平上升明顯，而IL-17水平則明顯下降。
　　4、不同感染程度和感染時(shí)間等因素也可對感染后脾臟T淋巴細(xì)胞亞群及其細(xì)胞因子分泌水平產(chǎn)生一定的影響。
　　5、BALB/c小鼠感染廣州管圓線蟲后，脾臟T淋巴細(xì)胞變化特點(diǎn)為：CD4+T細(xì)胞大量增殖和Th2型細(xì)胞極化。
　　6、在體液免疫方面，血清中特異