姜黃素對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、背景和目的 舌鱗癌(tongue squamous cell carcinoma TSCC)是口腔頜面部常見的惡性腫瘤，在口腔鱗狀細(xì)胞癌中構(gòu)成比最高，我國約占32.3％，歐美國家報道在21％～52％之間。近年來舌癌發(fā)病率呈快速上升趨勢，已引起各國的注意。臨床上由于腫瘤生長快、浸潤性強，加之舌體有豐富的淋巴管和血液循環(huán)以及舌的運動頻繁，常發(fā)生早期頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，因此舌癌有較高的復(fù)發(fā)率、淋巴轉(zhuǎn)移率，預(yù)后較差，被認(rèn)為是一種臨床生物學(xué)行為

2、較惡劣的惡性腫瘤，術(shù)后常需配合化療以提高療效。但是傳統(tǒng)化療常因腫瘤細(xì)胞耐藥或藥物毒副作用大患者不能耐受而導(dǎo)致治療失敗，所以研究和開發(fā)新的抗癌藥物，有效治療舌鱗癌將是臨床研究的一個重點。中藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥，尤其近年來其在抗腫瘤方面的獨特作用，成為國內(nèi)外醫(yī)藥工作者關(guān)注的一個熱點。姜黃素(curcumin)是中藥姜黃的一種活性成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗炎、清除自由基、抗微生物以及對心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多方面藥理作用，尤其姜黃素的抗腫瘤作用

3、日益引起人們重視，國內(nèi)外眾多學(xué)者對姜黃素的抗腫瘤作用及其機(jī)制做了大量研究，證實姜黃素具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的確切作用，然而有關(guān)其抗頭頸腫瘤研究卻罕見報道。本研究用一定濃度的姜黃素作用人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113細(xì)胞，觀察中藥有效成分姜黃素對人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞株增殖的抑制作用，初步探討姜黃素對Tca8113細(xì)胞株抑制作用的可能相關(guān)機(jī)制，為臨床研究提供新思路和借鑒。材料與方法人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113由上海交通大學(xué)

4、口腔醫(yī)學(xué)院提供，姜黃素由上海友思生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。將Tca8113細(xì)胞培養(yǎng)于普通的RPMI．1640培養(yǎng)基中，實驗組用含有不同濃度姜黃素(5μgmol/L，10μmol/L，20μmol/L，40μmol/L)的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，對照組細(xì)胞正常培養(yǎng)，至規(guī)定時間終止培養(yǎng)，進(jìn)行各項指標(biāo)檢測。采用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，MTT法檢測其生長抑制效應(yīng)，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期變化和細(xì)胞凋亡，定量分析Caspase-3表達(dá)的變化，免疫細(xì)胞化學(xué)

5、染色觀察Survivin、Ki-67、Bax等基因表達(dá)的變化，統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS13.0軟件，采用重復(fù)測量方差分析、x<'2>檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，取α=0.05為顯著性檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果 (1)隨著姜黃素濃度升高與作用時問的增加，其對細(xì)胞的生長、增殖抑制作用明顯增強，在倒置顯微鏡下觀察可見細(xì)胞生長增殖變慢、細(xì)胞形態(tài)變圓、變小，脫壁比細(xì)胞越來越多，漂浮在培養(yǎng)基中。MTT法檢測結(jié)果顯示姜黃素對細(xì)胞抑制效應(yīng)有濃度、時間依賴性。

6、 (2)隨著姜黃素濃度升高、作用時間的增加，細(xì)胞周期中G<,1>期細(xì)胞比例逐漸增加，由46.20％上升到64.80％，S期細(xì)胞比例由53.10％下降到31.40％。不同濃度之間、不同時間之間對細(xì)胞G<,1>期的阻滯作用有明顯差異性(P<0.05)。 (3)隨著姜黃素濃度升高、作用時間的增加，凋亡細(xì)胞比例逐漸增高，由1.80％上升到22.27％。不同濃度之間、不同時間之間對細(xì)胞凋亡率對改變有明顯差異性(P<0.05)。

7、 (4)姜黃素作用Tca8113細(xì)胞后，細(xì)胞中凋亡抑制基因Survivin與核增殖抗原Ki-67蛋白表達(dá)下降，與對照組相比Survivin在胞漿的著色減輕、Ki-67在胞核著色減輕，促凋亡基因Bax與促凋亡蛋白酶Caspase-3的表達(dá)明顯增強，Bax在細(xì)胞漿著色增強，蛋白定量分析Caspase-3表達(dá)量增加。 結(jié)論 (1)姜黃素能明顯抑制Tca8113細(xì)胞的生長、增殖，并有濃度、時間依賴性。 (2)姜黃素能

8、改變Tca8113細(xì)胞的周期分布，有明顯G<,1>期阻滯作用，并有量-效濃度、時-效關(guān)系。 (3)姜黃素可使Tca8113細(xì)胞的凋亡率增加，并有量-效濃度、時-效關(guān)系。 (4)姜黃素可下調(diào)Tca8113細(xì)胞中凋亡抑制基因Smrvin、核增殖抗原Ki-67的表達(dá)，上調(diào)促凋亡基因Bax、促凋亡蛋白酶Caspase-3的表達(dá)。 (5)細(xì)胞周期阻滯、凋亡抑制基因Survivin，核增殖抗原Ki-67表達(dá)的下降，促凋亡基因Bax和