急性酒精攝入對大鼠肝竇內(nèi)皮細胞窗孔及肝細胞間緊密連接的影響.pdf

1、前言: 酒精性肝病(ALD)是長期大量酒精攝入所導(dǎo)致的肝臟病變，是西方國家最常見的肝硬化病因，也是十大常見死因之一。ALD包括輕度酒精性肝損傷、酒精性脂肪肝、急性酒精性肝炎和酒精性肝硬化等。 我國ALD的診斷標(biāo)準(zhǔn)中將酒精引起的肝損害分為急性和慢性損害，即每日飲酒量超過40g持續(xù)5年以上可造成慢性肝損傷，而2周內(nèi)有大量飲酒史，折合酒精量>80g/d時即可發(fā)生急性酒精性脂肪肝。參與前者形成的肝臟組織學(xué)改變涵蓋了所有肝臟組織細

2、胞(包括肝細胞、星狀細胞和肝竇內(nèi)皮細胞等)、細胞因子(包括PDGF、TNF-alpha等)和細胞外基質(zhì)(MMP和TIMP等)，研究也比較深入，有些機制已經(jīng)逐漸明確。但對急性ALD組織學(xué)改變的研究較少，而酒精性脂肪肝出現(xiàn)又最早。后者的形成與肝臟組織細胞、細胞因子和細胞外基質(zhì)的關(guān)系并不十分清楚，急性酒精攝入對肝竇內(nèi)皮細胞(LSEC)及肝細胞間緊密連接的研究更少。本研究通過建立急性酒精性肝損害大鼠模型，觀察大鼠肝竇內(nèi)皮細胞窗孔的改變及對肝細胞

3、間緊密連接的影響，進一步探討急性酒精性肝損害的發(fā)生機制。 實驗方法: 一、急性酒精性肝損害動物模型的制備 雄性Wistar大鼠20只，體重190-220g，隨機分為酒精組和對照組，每組10只，灌胃前禁食12h。酒精組給予400ml/L乙醇5g·kg-1/次，每12h灌胃1次，共3次；對照組給予生理鹽水2.0ml/只，每12h灌胃1次，共3次。 二、肝臟組織病理學(xué)檢測 在最后一次灌胃后4h分別麻醉兩

4、組大鼠: 1、固定的肝組織經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，連續(xù)切片5μm進行HE染色，光鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)的改變。 2、另取新鮮肝組織固定、脫水、環(huán)氧樹脂包埋，用鉆石刀切成50nm薄片，然后經(jīng)醋酸雙氧鈾和檸檬酸鹽雙重染色，電鏡下觀察肝臟組織超微結(jié)構(gòu)的改變，包括肝竇內(nèi)皮細胞窗孔和肝細胞間的連接。 實驗結(jié)果: 一、實驗動物的一般狀況 正常組大鼠行動靈活，反應(yīng)如常。酒精組2只大鼠于灌胃后出現(xiàn)行

5、動遲緩，反應(yīng)遲鈍；1只大鼠出現(xiàn)豎毛，易激惹，間斷出現(xiàn)精神躁狂，抽搐，癲癇樣發(fā)作；在造模過程中酒精組有3只大鼠死亡。 二、肝臟一般組織病理學(xué)檢測 對照組肝臟組織結(jié)構(gòu)完整，細胞索以中央靜脈為中心向四周呈放射狀整齊排列，肝小葉輪廓清晰，肝細胞呈多邊形，細胞分界清，核圓而清晰，位于細胞中央，細胞質(zhì)豐富。 酒精組肝竇擴張，肝細胞腫脹，細胞質(zhì)疏松，細胞質(zhì)內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的圓形脂肪空泡，散在肝細胞嗜酸性變，小葉中央靜脈

6、周圍和匯管區(qū)有少量炎細胞浸潤。 三、電鏡下肝臟組織病理學(xué)檢查 對照組血竇和狄氏間隙大小正常，肝竇內(nèi)皮細胞扁平，有許多大小不等的窗孔(直徑一般約在132-159nm)，窗孔無隔膜，胞質(zhì)內(nèi)有大量吞飲小泡，內(nèi)皮下無基膜。在所有標(biāo)本中均可見肝細胞間緊密連接，并且其層次清楚、光滑，走行自然。 酒精組肝竇內(nèi)皮細胞輕度增生，窗孔數(shù)量減少、直徑增大(窗孔直徑擴大在約在163-212nm)。2只大鼠出現(xiàn)窗孔斷裂。5只(4/7)大鼠