2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  IVF周期中大劑量促排卵藥物使用后多卵泡同時發(fā)育所產(chǎn)生的超生理劑量的雌激素水平被認為和ART不良妊娠結(jié)局密切相關(guān)。實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)ART來源胎盤緊密連接功能異常,由此推測IVF周期高雌激素可能通過胎盤緊密連接進而影響滋養(yǎng)細胞侵襲能力,引發(fā)相關(guān)妊娠合并癥。前期實驗室已建立滋養(yǎng)細胞體外培養(yǎng)模型,通過免疫熒光開展了滋養(yǎng)細胞緊密連接因子的表達和定位研究,并通過跨上皮電阻和細胞旁滲透性的測定實現(xiàn)了緊密連接功能的評估。本研究檢測

2、正常自然妊娠女性妊娠早期和足月分娩時外周血、絨毛組織或胎盤組織中雌二醇(E2)水平以及足月分娩時臍動脈血E2水平;擬探討生理和超生理濃度雌激素對滋養(yǎng)細胞緊密連接功能及侵襲能力的影響;進一步研究IVF超生理雌激素水平和不良妊娠結(jié)局關(guān)聯(lián),為優(yōu)化ART條件、提高ART技術(shù)安全性提供新的依據(jù)。
  方法:
  (1)本研究納入20例非意愿妊娠行妊娠早期流產(chǎn)者、20例足月妊娠行剖宮產(chǎn)者,采用化學發(fā)光免疫分析(CLLA)檢測妊娠早期流產(chǎn)

3、絨毛組織、孕婦外周血以及分娩時孕婦外周血、臍動脈血和胎盤組織中E2水平。
  (2)利用Millicell小室系統(tǒng)培養(yǎng)BeWo細胞,建立體外滋養(yǎng)層細胞單層培養(yǎng)模型。
  (3)利用不同濃度(0M、5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M、5×10-10M)17β-E2作用BeWo細胞一定時間(1h、3h、6h、12h、24h)后,分別通過測定細胞跨上皮電阻(Transepithelial electrical resi

4、stance,TEER)和細胞旁滲透性的改變(Paracellular permeability,CPP)的改變,評估雌激素作用下滋養(yǎng)層緊密連接功能的改變。
  (4)確定處理BeWo細胞12小時的選擇,該時間點作用BeWo細胞能最大程度反映雌激素處理細胞后改變。通過Western Blot檢測緊密連接因子ZO-1、OCLN、CLDN3、CLDN4、CLDN5、CLDN8在不同濃度17β-E2處理12h后蛋白水平表達改變。

5、  (5)利用免疫熒光技術(shù)檢測一定濃度的17β-E2處理BeWo細胞12h后緊密連接因子細胞定位的變化,研究雌激素對緊密連接功能改變的可能原因。
  (6)體外培養(yǎng)BeWo細胞,CCK-8實驗檢測不同濃度(0M、5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M、5×10-10M)17β-E2作用BeWo細胞12h后細胞活力改變,確定該條件的選擇可以用于后續(xù)的BeWo細胞侵襲實驗。
  (7)利用以上實驗條件,細胞體外侵襲實驗(

6、Transwell Matrigel Invasion Assay)檢測細胞侵襲能力的改變。并進一步通過Western Blot檢測基質(zhì)金屬蛋白酶2和9(MMP2、MMP9)的表達,探討高雌激素導(dǎo)致滋養(yǎng)層細胞侵襲能力受損的可能原因。
  結(jié)果:
  (1)妊娠早期的孕婦血清E2濃度[(3.44±1.30)nmol/L]低于足月妊娠孕婦[(509.78±197.82)nmol/L](t=10.2,P<0.001);而孕早期絨毛

7、組織中E2濃度[(30.82±13.91)pmol/mg]顯著高于足月胎盤組織中E2濃度[(17.21±5.37)pmol/mg](t=4.1,P<0.001))。
  (2)利用Millicell小室體外培養(yǎng)BeWo細胞,通過TEER測定和CPP分析評估不同濃度(0M、5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M、5×10-10M)雌激素對滋養(yǎng)層細胞作用不同時間后,對其緊密連接功能的影響。結(jié)果顯示不同濃度17β-E2處理BeW

8、o細胞1h和3h后,其TEER均無明顯變化(P>0.05);5×10-7M、5×10-8M的17β-E2處理BeWo細胞6h后,其TEER顯著降低,CPP顯著升高(P<0.05);
  (3)5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M的17β-E2處理BeWo細胞12h和24h后,其TEER顯著降低,CPP顯著升高(P<0.05)。其中在12h,17β-E2對BeWo的處理效應(yīng)最為明顯,且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性。
  (4

9、)不同濃度17β-E2作用BeWo細胞12h后Western Blot檢測各緊密連接因子蛋白水平的表達,發(fā)現(xiàn)OCLN在5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M雌激素水平表達量下調(diào)(P<0.05);CLDN3在5×10-7M、5×10-8M雌激素水平表達量下調(diào)(P<0.05);其他緊密連接因子表達量無明顯改變(P>0.05)。5×10-7M17β-E2處理BeWo細胞12h后,免疫熒光結(jié)果顯示OCLN和CLDN3表達量下調(diào),CLDN

10、5呈現(xiàn)出從胞漿轉(zhuǎn)移至胞核的現(xiàn)象。
  (5)體外培養(yǎng)BeWo細胞,CCK-8實驗檢測不同濃度(0M、5×10-7M、5×10-8M、5×10-9M、5×10-10M)17β-E2作用BeWo細胞12h,細胞活力沒有明顯改變(P>0.05)。
  (6)細胞體外侵襲實驗顯示僅5×10-7M、5×10-8M雌激素作用BeWo細胞12后,BeWo細胞侵襲能力下降;Western Blot結(jié)果顯示同等條件下MMP2表達下調(diào)(P<0.

11、05),MMP9無明顯改變(P>0.05)。
  結(jié)論:
  (1)正常自然妊娠的早期絨毛組織中含有高濃度的E2,足月分娩時胎盤組織中E2相對較低。
  (2)本研究以BeWo細胞為模型,發(fā)現(xiàn)高水平雌激素可引起滋養(yǎng)層細胞緊密連接功能的破壞,提示ART促排產(chǎn)生的高雌激素水平可能會通過影響滋養(yǎng)層細胞間緊密連接結(jié)構(gòu)進而影響胎盤功能的正常發(fā)揮。
  (3)高水平雌激素可以導(dǎo)致BeWo細胞侵襲功能受損,提示ART促排產(chǎn)生的

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