大黃素對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：胎兒結(jié)腸上皮細(xì)胞（FHC）經(jīng)缺氧/再復(fù)氧（H/R）和脂多糖（LPS）處理，觀察緊密連接蛋白表達(dá)量及分布的變化，觀察低氧誘導(dǎo)因子-1?（HIF-1?）和核轉(zhuǎn)錄因子-?B（NF-?B）及其下游信號(hào)通路表達(dá)的變化，并探究大黃素干預(yù)對(duì)緊密連接蛋白及各通路的影響。
　　方法：胎兒結(jié)腸上皮細(xì)胞株（FHC）經(jīng)缺氧再復(fù)氧和脂多糖處理來模擬腸上皮細(xì)胞的缺血/再灌注損傷。共分為4組：?常氧組：用溫度為37℃，含95％空氣和5%CO2溫箱，用含1

2、0％胎牛血清（Gibico）的DMEM：F12培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞作為正常對(duì)照。?H/R+LPS組：于37℃下將細(xì)胞放入含1%O2，94%N2，5%CO2混合厭氧氣體的厭氧培養(yǎng)箱3h后復(fù)氧培養(yǎng)2h，同時(shí)給予LPS為1mg·L-1的含10％胎牛血清（Gibico）的DMEM：F12培養(yǎng)基刺激。?大黃素干預(yù)組：處理為在?的基礎(chǔ)上給予80μmol·L-1大黃素進(jìn)行干預(yù)。?DMOG處理組：常氧37℃培養(yǎng)條件下加用二甲基乙二?；拾彼?DMOG)10m

3、M處理5h。用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)（Western Blot）檢測(cè)緊密連接蛋白ZO-1、occludin、低氧誘導(dǎo)因子-1?（HIF-1α）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-?B抑制蛋白-?（pI?B-?）、磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-?Bp65（pNF-?Bp65）、環(huán)氧化酶-2（COX-2）；間接免疫熒光觀察緊密連接蛋白ZO-1的分布。
　　結(jié)果：HR+LPS組，DMOG處理組，大黃素干預(yù)組的ZO-1表達(dá)量均較常氧組減少，

4、大黃素干預(yù)組較HR+LPS組表達(dá)量多（p<0.05），HR+LPS組，DMOG處理組，大黃素干預(yù)組的occludin表達(dá)較常氧組減少，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）;免疫熒光結(jié)果顯示，常氧組細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1沿細(xì)胞膜分布，連續(xù)圓滑，排列規(guī)則，DMOG處理組的ZO-1表達(dá)明顯減少，不連續(xù)；HR+LPS組表達(dá)量減少，排列不規(guī)則，不連續(xù)，出現(xiàn)斷裂，鋸齒狀等分布，大黃素干預(yù)組較HR+LPS組相比，表達(dá)量稍多，排列不規(guī)則緩解，偶有不連續(xù)，

5、斷裂等分布；?與常氧比較， HR+ LPS組，DMOG處理組，大黃素干預(yù)組HIF-1?/NF-?B－COX-2信號(hào)通路各因子表達(dá)量均升高（p<0.05），大黃素干預(yù)組較HR+LPS組相比，HIF-1?/NF-?B－COX-2信號(hào)通路因子表達(dá)減低(p<0.05)；?與常氧組比較，HR+ LPS組，DMOG處理組，大黃素干預(yù)組VEGF表達(dá)均升高（p<0.05）大黃素干預(yù)組VEGF表達(dá)較HR+LPS組表達(dá)減少（p<0.05）。
　　結(jié)論

6、：缺氧再復(fù)氧與脂多糖刺激腸上皮細(xì)胞可使其緊密連接蛋白表達(dá)減少，結(jié)構(gòu)破壞，分布異常；?缺氧再復(fù)氧與脂多糖刺激腸上皮細(xì)胞可激活HIF-1?/NF-?B－COX-2信號(hào)通路，使用DMOG穩(wěn)定表達(dá)HIF-1?亦可引起腸上皮細(xì)胞中NF-?B， COX-2的激活及緊密連接蛋白的變化，進(jìn)一步驗(yàn)證了HIF-1?對(duì)腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的損傷作用及HIF-1?對(duì)NF-?B通路及COX-2的調(diào)控作用；?缺氧再復(fù)氧與脂多糖刺激腸上皮細(xì)胞引起的緊密連接蛋白變化