白頭翁醇提物對(duì)TNBS誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎腸黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：研究白頭翁醇提物對(duì)三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonic acid，TNBS）誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎腸黏膜上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的調(diào)控，進(jìn)一步探討白頭翁醇提物對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎的腸黏膜屏障的保護(hù)作用。
　　 方法：SD大鼠（雌雄兼?zhèn)洌?8只，分為四組：正常對(duì)照組（對(duì)照組，n=8）、TNBS模型組（模型組，n=10）、白頭翁醇提物治療組（白頭翁組，n=10）、金雙歧治療組（金雙歧組，n=10）。建立TNBS誘導(dǎo)

2、大鼠結(jié)腸炎模型：SD大鼠術(shù)前禁食24h，模型組、白頭翁組和金雙歧組用一直徑約2mm、長(zhǎng)約12cm的硅膠管由肛門(mén)輕緩插入深約8cm，以含100mg/kgTNBS的等體積50％乙醇溶液緩慢注入結(jié)腸，讓動(dòng)物保持肛門(mén)高位清醒，對(duì)照組則以等體積生理鹽水緩慢注入結(jié)腸。動(dòng)物造模后，對(duì)照組和模型組第1～7天每只大鼠每天用1ml蒸餾水灌腸1次，并自由飲水；白頭翁組每只大鼠第1～7天每天用白頭翁醇提物灌腸，白頭翁醇提物用量按2g/kg用蒸餾水配制成1ml，

3、每天1次，并自由飲水；金雙歧組每只大鼠第1～7天每天用金雙歧2Co/只磨成粉末用蒸餾水配制成1ml灌腸，并自由飲水。每天觀察大鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食、活動(dòng)、大便和體重等情況。于造模后第8天取眼眶靜脈血測(cè)定血內(nèi)毒素，并斷頸處死所有大鼠，游離并取下整段結(jié)腸，沿腸系膜縱向剪開(kāi)，清潔腸內(nèi)污物后觀察結(jié)腸標(biāo)本充血水腫情況、潰瘍大小、分布、有無(wú)活動(dòng)性出血等情況；取1cm病變組織，行HE染色及免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Occludin的表達(dá)，且進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)（DA

4、I）和組織學(xué)損傷評(píng)分；余下標(biāo)本液氮凍存，用于ELISA法測(cè)定結(jié)腸組織中的TNF-a、IL-10。
　　 結(jié)果：①一般情況：在造模后24小時(shí)，模型組大鼠出現(xiàn)精神差，活動(dòng)、飲食進(jìn)一步減少，腹瀉伴肉眼便血或糞便隱血試驗(yàn)陽(yáng)性，第2～5天腹瀉最重，5～6天后血便逐漸減輕，食量恢復(fù)。白頭翁組、金雙歧組大鼠癥狀較模型組有明顯改善，于造模后24小時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)大便稀溏或不成形，血便多表現(xiàn)為隱血陽(yáng)性，第2～3天腹瀉稍重，3～4天后腹瀉、血便逐漸減輕，

5、活動(dòng)逐漸增多，食量慢慢恢復(fù)。在組織學(xué)上模型組結(jié)腸黏膜糜爛和潰瘍形成面積較大，多累及肌層，腺管扭曲、部分腺上皮不典型增生；白頭翁組、金雙歧組結(jié)腸黏膜糜爛和潰瘍形成面積較小，多累及至黏膜下層，腺管扭曲、部分腺上皮不典型增生不明顯；對(duì)照組大鼠結(jié)腸黏膜上皮完整，結(jié)構(gòu)清晰，腺體排列規(guī)則，固有膜內(nèi)杯狀細(xì)胞豐富，肌層無(wú)異常，偶有微量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。②疾病活動(dòng)指數(shù)（DAD和組織學(xué)損傷評(píng)分：模型組、白頭翁組、金雙歧組和正常組DAI分別是9.20±1.75、6

6、.50±1.27、5.90±1.67和0.75±0.71；組織學(xué)損傷評(píng)分分別是7.10±0.99、5.00±1.05、4.80±1.23和0.25±0.46，與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），白頭翁組和金雙歧組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。③結(jié)腸組織TNF-a、IL-10和內(nèi)毒素含量：TNBS誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎后，結(jié)腸組織TNF-a，水平升高、IL-10水平降低和血清內(nèi)毒素水平升高，而經(jīng)白頭翁醇提物和雙歧桿菌嗜酸乳

7、桿菌腸球菌三聯(lián)活菌處理后，結(jié)腸組織TNF-a，水平降低（657.54±149.60、521.24±109.38、514.73±163.47和205.40±72.49，P<0.05）、血內(nèi)毒素水平降低（O.213±0.023、O.148±0.093、O.153±0.106和0.071±0.034，P<0.05）和IL-10水平升高（42.92±23.74、92.19±30.09、89.77±28.48和123.00±36.16，P<0.0

8、5），而白頭翁組和金雙歧組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。④結(jié)腸腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Occludin的表達(dá)：模型組、白頭翁組、金雙歧組和正常組分別是25.80±10.28、50.70±17.02、52.40±16.15和81.62±1.39，與正常組比較，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），白頭翁組和金雙歧組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 結(jié)論：白頭翁醇提物對(duì)TNBS誘導(dǎo)大鼠結(jié)腸炎腸黏膜屏障具有明顯的