2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景與目的:急性肝損傷的特征是短時間內(nèi)肝細胞大量變性、壞死并伴炎性細胞浸潤,其臨床治療成為棘手問題。因病毒、藥物、細菌、酒精及遺傳等因素引起的急慢性肝臟疾病極大危害著人們的健康。目前公認的治療急性重癥及中晚期肝病的最有效方法是肝移植,但因肝源不足、價格昂貴及移植后免疫排斥反應等因素,應用受到限制。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是來自中胚層的一群異質(zhì)細胞,自我復制能力強

2、,并具有多向分化的潛能,在適宜的條件下可以分化為成骨、軟骨、脂肪細胞,甚至源于中胚層的心肌細胞、外胚層的神經(jīng)細胞和內(nèi)胚層的肝細胞。與胚胎干細胞相比,BMSCs因其取材方便,在適當條件下可大量擴增、低免疫排斥、無倫理學爭議、花費較低等特點成為組織工程和細胞治療的研究熱點。本實驗通過白酒一次性灌胃制備急性酒精性肝損傷大鼠模型,并用損傷肝臟組織勻漿培養(yǎng)第3代大鼠BMSCs,誘導其向肝細胞方向分化,來探討B(tài)MSCs在病理微環(huán)境下向肝細胞分化的可

3、行性,了解BMSCs治療急性肝臟疾病的可能機制,為BMSCs臨床應用提供理論依據(jù)。
  方法:(1)3~4周齡健康雄性SD大鼠,在LG-DMEM(含10%胎牛血清)培養(yǎng)體系下,采用完全貼壁法培養(yǎng)大鼠股骨、脛骨骨髓液獲得BMSCs,體外傳代;倒置相差顯微鏡下每日觀察BMSCs的生長情況及其形態(tài)學特點;MTT法檢測第3、6代細胞并繪制生長曲線,流式細胞法檢測細胞表面抗原CD34、CD29、CD105的表達。(2)400~500g健康雄

4、性SD大鼠10只,隨機分為肝損傷組及對照組,每組5只,禁食不禁水12h,肝損傷組以56°紅星二鍋頭一次性經(jīng)口灌胃10ml/kg(折合酒精4.5g/kg),對照組給予同等量生理鹽水灌胃,24h后處死大鼠,取肝臟組織進行組織學檢查。(3)取正常及肝損傷組大鼠肝臟,分別按肝臟濕重0.1g加1ml低糖DMEM完全培養(yǎng)基的比例冰上研磨制備肝臟組織勻漿。用損傷肝勻漿誘導第3代BMSCs分化,正常肝勻漿做對照,在第0、3、7、10、14、21天用RT

5、-PCR和western blot法檢測AFP、ALB的表達。
  結(jié)果:(1)原代細胞72首次換液后可見散在分布的長梭形細胞,之后細胞生長迅速,在第8-9天融合,傳代細胞生長迅速,形態(tài)均一,呈漩渦狀、魚群狀生長;生長曲線示細胞第1-2天為潛伏期,4-6天為增殖期,生長迅速,在第7-8天生長緩慢進入平臺期;細胞陽性表達CD29、CD105,陰性表達CD34。(2)肝損傷組大鼠肝臟病理呈明顯肝脂肪變性,對照組肝臟組織形態(tài)正常。(3)

6、在損傷及正常肝勻漿誘導下,兩組BMSCs均從長梭形逐漸向多角形改變,第14天左右細胞出現(xiàn)肝細胞樣改變。兩組細胞均在第3天檢測到AFP的表達,表達量在第7天左右達到高峰后迅速下降,第14天時表達量極少;在第7天檢測到ALB的表達,且隨時間延長表達量逐漸增加,mRNA水平與蛋白水平表達一致。但損傷肝勻漿與正常肝勻漿誘導培養(yǎng)的細胞各時間點AFP和ALB的表達量無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
  結(jié)論:(1)完全貼壁法培養(yǎng)骨髓液可獲取骨髓

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