大鼠肺勻漿上清液體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:探討大鼠肺勻漿上清液誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肺泡上皮細(xì)胞分化的可行性。
　　方法:利用全骨髓貼壁分離法分離、純化大鼠的間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察細(xì)胞的形態(tài)，繪制生長曲線，并采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面抗原CD29、CD90、CD45、CD34、CD49d的表達(dá)情況。經(jīng)骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后，分別采用茜素紅染色法、油紅O染色法、甲苯胺藍(lán)染色法檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化情況。正常肺組織和博來霉素誘導(dǎo)的損傷肺組織，分別提取

2、勻漿上清液，誘導(dǎo)第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。實驗組分為三組:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+正常大鼠肺勻漿上清液組，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+博來霉素?fù)p傷大鼠肺勻漿上清液組，持續(xù)誘導(dǎo)10天，通過細(xì)胞免疫熒光法和RT-PCR法分別在蛋白水平和基因水平檢測SP-C的表達(dá)。
　　結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)到第3代時形成漩渦狀、紡錘形、形態(tài)相對均一的貼壁細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示其表面抗原CD29、CD90呈陽性，CD49d、CD34、CD4

3、5呈陰性。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后，茜素紅染色呈紅色，油紅O染色呈橘紅色，甲苯胺藍(lán)呈藍(lán)色。經(jīng)肺勻漿上清液誘導(dǎo)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞免疫熒光和RT-PCR顯示各干預(yù)組均有SP-C蛋白的表達(dá)，對照組無SP-C蛋白的表達(dá)。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果:正常及博來霉素?fù)p傷大鼠肺勻漿上清液誘導(dǎo)細(xì)胞免疫熒光SP-C蛋白的表達(dá)陽性率分別為13.29％及25.27％; RT-PCR檢測顯示博來霉素?fù)p傷的肺勻漿上清液陽性率較正常肺勻