大鼠咬合創(chuàng)傷去除前后牙周組織IL-1β、IL-6、TNFα、RANKL-OPG的表達.pdf

1、咬合創(chuàng)傷發(fā)生時，牙周組織往往承受著不同類型以及不同方向的力，過大的壓應(yīng)力作用于牙槽嵴，可導(dǎo)致額外的骨吸收，這是一種高轉(zhuǎn)換的骨改建過程，有關(guān)這一過程的詳細機制，至今仍不清楚。從正畸牙齒移動以及牙周炎、根尖周炎等疾病與細胞因子關(guān)系的研究證實，某些細胞因子在骨吸收過程中起著十分重要的作用。己發(fā)現(xiàn)的與骨改建相關(guān)的細胞因子如白細胞介素-1，白細胞介素-6和腫瘤壞死因子、核因子-kB受體活化因子配體(RANKL)等，在咬合創(chuàng)傷中對牙周組織改建有何影

2、響，表達有無變化、有何特點及規(guī)律等經(jīng)檢索未見研究報道。 本研究通過建立大鼠咬合創(chuàng)傷模型，觀察在咬合創(chuàng)傷去除前后細胞因子在牙周組織中的表達狀況，了解其改變與咬合創(chuàng)傷病變發(fā)展、愈后的關(guān)系，為臨床進一步探討咬合創(chuàng)傷性牙周改變的病理過程、發(fā)病機制和恢復(fù)過程，并為臨床實施干預(yù)的可能性和方法提供實驗依據(jù)。 第一部分大鼠咬合創(chuàng)傷模型的建立目的：探討建立創(chuàng)傷咬合動物模型的有效方法，為探討咬合創(chuàng)傷致牙周組織的改建的研究提供依據(jù)。

3、方法：將35只大鼠隨機分為7組，每組5只.即0d組，1d組，3d組，7d組，14d組，28d組及創(chuàng)傷14d后咬合高點去除14天組。除0d組外各組粘結(jié)0.5mm高方絲。預(yù)定實驗時間攝下頜磨牙根尖X片及制作不脫鈣牙周組織切片。 結(jié)果：觀測時間14d內(nèi)所有方絲固位良好；28d有3例脫落。創(chuàng)傷牙可見咬合面磨損，根尖X片顯示牙周膜微增寬。創(chuàng)傷組大鼠HE染色顯示受壓迫側(cè)(單側(cè)或雙側(cè))牙槽骨邊緣破骨細胞趨附，牙槽骨邊緣凹凸不平。結(jié)論：大鼠磨牙

4、早接觸的創(chuàng)傷咬合模型有效，可用于咬合創(chuàng)傷的基礎(chǔ)研究。 第二部分咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙周組織IL-1β、IL-6、TNFα的表達 實驗1咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙周組織IL-1β的蛋白及mRNA表達 目的：探討咬合創(chuàng)傷對大鼠牙周組織IL-1β表達的影響。 方法1：選用35只SD雄性大鼠，每組5只；分組為：對照組、咬合創(chuàng)傷1d組、3d組、7d組、14d組、28d組、去除創(chuàng)傷組。建立大鼠咬合創(chuàng)傷模型。制作不脫鈣牙周

5、組織標本，組織形態(tài)觀察及免疫組化染色。 方法2：選用70只SD雄性大鼠，每組10只，分別為0d組，創(chuàng)傷1d組，3d組，7d組，14d組，28d組和創(chuàng)傷去除組；建立大鼠咬合創(chuàng)傷模型。在無RNase條件下，每組5只大鼠提取牙周膜及牙槽骨總RNA，另5只提取牙槽骨RNA。RT-PCR檢測IL-1βmRNA表達。 結(jié)果：1.咬合創(chuàng)傷后IL-1β在牙周膜上蛋白表達逐漸增強，第7天及14天最強，以后逐漸減弱。成骨細胞第7天后部分表達

6、，逐漸增多。 2.去除創(chuàng)傷后，IL-1β在牙周膜上蛋白表達減弱，但仍高于正常組。 3.咬合創(chuàng)傷后，IL-1βmRNA在牙槽骨及牙周膜中表達以牙周膜表達為主，且逐漸增強，第14天達到高峰。 4.去除創(chuàng)傷后，IL-1βmRNA在牙槽骨及牙周膜中表達減弱，仍高于正常組。與IL-1β蛋白表達有一致性。 5.IL-1β參與了咬合創(chuàng)傷后牙周組織適應(yīng)性改建，創(chuàng)傷后去除病因，牙周組織IL-1β蛋白及mRNA表達至少在實驗

7、時間內(nèi)沒有恢復(fù)正常，自愈需要較長時間。 實驗2咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙周組織IL-6的蛋白及mRNA表達 目的：探討大鼠在咬合創(chuàng)傷去除前后IL-6在牙周組織適應(yīng)性改建過程中的變化及作用。 方法：同實驗1。 結(jié)果：1.咬合創(chuàng)傷后IL-6在牙周膜上蛋白表達逐漸增強，第7天最強，以后逐漸減弱。成骨細胞第7天后部分表達，隨時間表達逐漸增多。 2.去除創(chuàng)傷后，IL-6在牙周膜上蛋白表達減弱，但仍高于正常組。

8、 3.咬合創(chuàng)傷后，IL-6mRNA在牙槽骨及牙周膜組織中以牙周膜表達為主，且逐漸增強，第3、7、14天達到高峰。與IL-6蛋白表達規(guī)律有一致性。 4.去除創(chuàng)傷后，IL-6mRNA在牙槽骨及牙周膜中表達減弱，仍高于正常組。與IL-6蛋白表達一致。 5.IL-6是局部產(chǎn)生的細胞因子。 6.IL-6參與了咬合創(chuàng)傷后牙周組織適應(yīng)性改建。較長時間創(chuàng)傷后去除病因，牙周組織IL-6蛋白及mRNA表達至少在實驗時間內(nèi)沒有恢

9、復(fù)正常。 實驗3咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙周組織的TNFα蛋白及mRNA表達 目的：探討大鼠牙周組織在咬合創(chuàng)傷去除前后TNFα蛋白及mRNA的表達狀況。 方法：同實驗1。 結(jié)果：1.咬合創(chuàng)傷后TNFα在牙周膜上蛋白表達逐漸增強，第7天最強，以后逐漸減弱。成骨細胞第7天后少量表達，逐漸增多。 2.去除創(chuàng)傷后，TNFα在牙周膜上蛋白表達顯著減弱，但仍高于正常組。 3.咬合創(chuàng)傷后，TNFαmRNA在

10、牙槽骨和牙周膜組織中以牙周膜表達為主。 隨時間表達逐漸增強，第14天達到高峰。與在牙周膜上的蛋白表達不一致。 4.去除創(chuàng)傷后，TNFαmRNA在牙槽骨和牙周膜組織中表達減弱，已達到正常水平。與TNFα在牙周膜上蛋白表達不完全一致。 5.TNFα參與了咬合創(chuàng)傷后牙周組織適應(yīng)性改建。創(chuàng)傷去除組牙周組織TNFα蛋白及mRNA表達比創(chuàng)傷去除前時有顯著性下降。 第三部分咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙槽骨及牙周膜中RANKL

11、/OPGmRNA的表達 目的：通過建立咬合創(chuàng)傷動物模型，利用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，研究咬合創(chuàng)傷去除前后，牙槽骨內(nèi)RANKL/OPGmRNA表達的動態(tài)變化，探討RANKL/OPG在咬合創(chuàng)傷去除前后，在牙周組織改建過程中的表達規(guī)律。 方法：同實驗1方法2。 結(jié)果：1.咬合創(chuàng)傷后，RANKLmRNA在牙槽骨及牙周膜組織中表達逐漸增強，第3、7天達到高峰，以后漸減弱。去除創(chuàng)傷后，RANKLmRNA在牙周組織中表達減弱，已達到

12、正常水平；與創(chuàng)傷28天無顯著性差異。 2.咬合創(chuàng)傷后，OPGmRNA在牙槽骨及牙周膜組織中表達均逐漸增強，第7天達到高峰，以后顯著下降。 3.去除創(chuàng)傷后，OPGmRNA在牙槽骨及牙周膜組織中表達與創(chuàng)傷14天、28天無顯著性差異。表達沒有達到正常水平，與對照組比較有顯著性差異。 4.OPG及RANKLmRNA在牙槽骨中表達低。 5.RANKL/OPG在牙槽骨及牙周膜組織中表達比值變化較小。 6.非創(chuàng)

13、傷側(cè)RANKL及OPGmRNA表達變化較小。RANKL/OPG比值平穩(wěn)。 7.RANKL及OPG可能參與了咬合創(chuàng)傷去除前后大鼠牙周組織改建。 結(jié)論1.大鼠磨牙早接觸的創(chuàng)傷咬合模型有效，可用于咬合創(chuàng)傷的基礎(chǔ)研究。 2.正常情況下，牙周組織細胞表達IL1β、IL6、TNFα及RANKL、OPG的動態(tài)平衡是維護牙周組織健康，保證牙周組織正常骨代謝所必需的。 3.咬合創(chuàng)傷去除前后牙周組織表達IL1β、IL6、TN

14、Fα蛋白及mRNA主要在牙周膜。 4.IL1β、IL6、TNFα及RANKL、OPG參與了咬合創(chuàng)傷后牙周組織改建過程，其表達各自具有較明顯的時間變化特點。 5.IL1、IL6、TNFα牙槽骨及牙周膜mRNA表達與IL1β、IL6、TNFα蛋白表達規(guī)律有不完全一致性。 6.在本實驗中IL1β、IL6、TNFα表達變化大；而RANKL/OPGmRNA表達比值變化相對小。 綜上所述，我們認為咬合創(chuàng)傷中各種細胞因