干酪乳桿菌LC2W對胃癌細胞的黏附作用及對幽門螺桿菌的拮抗作用.pdf

1、益生菌在胃腸道中的定殖是發(fā)揮其益生作用的前提條件，黏附是益生菌定殖過程的第一步，同時黏附的益生菌能夠排斥外來病原菌的入侵，從而起到抑制致病菌感染的作用。由于菌體表面各種與黏附相關的成分是介導黏附的基礎，因此，對這些成分的研究是闡明益生菌黏附機理的必要條件。黏附機理的研究對于消化道微生態(tài)環(huán)境的改善以及病原菌的生態(tài)防治均具有重要意義。本文以干酪乳桿菌 LC2W(Lactobacillus casei LC2W)為對象，就其黏附性質、對幽門螺

2、桿菌SSl(Helicobacter pylori SSl)體外黏附抑制作用及其參與黏附過程的表面蛋白成分進行了初步的分離和鑒定。 首先，采用形態(tài)學觀察和顯微計數(shù)的方法比較了L.casei LC2W的菌液濃度、懸浮介質及其pH值對人胃癌細胞株MKN-45和HGC-27的黏附情況。結果表明，L.caseiLC2W對兩種細胞均具有黏附性，但對MKN-45的黏附性更強。這種黏附作用具有菌濃度依賴性，當加入的菌懸液濃度達到一定數(shù)量時(1

3、0<'9> CFU/mL)，平均每個細胞黏附的L.casei LC2W數(shù)量趨于飽和。不同的懸浮介質對L.casei LC2W的黏附性也具有顯著的差異，其中懸浮于耗盡培養(yǎng)上清液(SCS)的L.casei LC2W表現(xiàn)出最強的黏附性。此外，懸浮介質的pH值對L.casei LC2W的黏附性也有影響，pH值4.0時黏附性最好。將不同懸浮介質的pH值調整到7.0后，SCS仍能很好的促進L.caseiLC2W的黏附作用，表明SCS中存在某種促進黏

4、附的物質。由此推測，L.casei LC2W對胃癌細胞的黏附機理可能為黏附素與受體的特異性結合。 其次，為研究L.casei LC2W和H.pylori SSl對MKN-45細胞的黏附情況，引入數(shù)學模型，分別研究了L.casei LC2W與H.pylori SSl的競爭、排除和替代作用。結果表明，L.casei LC2W可以競爭H.pylori SSl黏附位點或受體，使后者的黏附值達不到理論值；L.casei LC2W對H.py

5、lori SSl的黏附具有很強的排除作用而替代作用不明顯或過程非常緩慢。細胞活性檢測結果表明，L.casei LC2W能降低H.pylori SSl對MKN-45細胞的損傷。綜上所述，L.casei LC2W對胃上皮細胞保護作用的強弱與其黏附能力有很大的相關性，L.casei LC2W可能通過黏附的競爭性占位效應，保護了細胞膜的完整性，使宿主細胞免受損傷。 再次，研究了L.casei LC2W的表面性質與黏附作用的關系。結果表明

6、，L.caseiLC2W菌體具有疏水性和自聚合能力，黏附能力與疏水性存在很大的相關性；利用酶，化學物質和熱對L.casei LC2W的菌體進行處理后，其表面疏水性和對MKN-45細胞的黏附性均有不同變化。表明L.casei LC2W的黏附作用是多種因素作用的結果，但蛋白類物質起主導作用，表明其黏附素的主要成分為蛋白質。 最后，利用5M氯化鋰對L.casei LC2W細胞表面蛋白進行了提取。掃描電鏡結果顯示，抽提后細胞表面被破壞而