TREK-1亞型雙孔鉀離子通道參與調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)再生及抑郁樣行為的研究.pdf

1、TREK-1亞型雙孔鉀離子通道參與調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)再生及抑郁樣行為的研究
　　 研究背景:抑郁癥是最常見的精神障礙之一，其高死亡率、高致殘率，使之成為21世紀(jì)最重要的引起人類致殘的疾病。關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制至今不明，存在有諸多假說(shuō)，目前比較一致的觀點(diǎn)認(rèn)為抑郁癥的發(fā)生與慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)再生障礙密切相關(guān)，同時(shí)，抗抑郁劑的起效與其逆轉(zhuǎn)神經(jīng)再生障礙有關(guān)。但神經(jīng)再生作為抑郁癥及抗抑郁藥治療的最終作用靶點(diǎn)，其中涉及的具體調(diào)控機(jī)制還不清楚。

2、最新的研究提示TREK-1亞型雙孔鉀離子通道(two-poredomainpotassiumchannels，K2P)與抑郁癥關(guān)系密切，抗抑郁藥氟西汀可對(duì)TREK-1電流產(chǎn)生劑量依賴性抑制作用，TREK-1基因（kcnk2-/-）敲除小鼠表現(xiàn)出明顯的抵抗抑郁表型，TREK-1的阻斷劑Spadin可快速、有效地發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)。因此，探索TREK-1在海馬神經(jīng)再生以及慢性應(yīng)激和抗抑郁藥調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)再生中的作用，對(duì)進(jìn)一步探討抑郁癥的病因及尋找

3、抗抑郁治療的新策略有重要的意義。
　　 目的:(1)探討TREK-1在正常大鼠海馬神經(jīng)再生中的作用。(2)研究TREK-1在糖皮質(zhì)激素和氟西汀影響神經(jīng)干細(xì)胞增殖中的作用。(3)探討TREK-1是否會(huì)參與抑郁癥的發(fā)生及艾司西酞普蘭對(duì)抑郁癥狀的緩解作用。
　　 方法:(1)體外培養(yǎng)胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞，利用RT-PCR、Westernblotting和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法檢測(cè)TREK-1基因、蛋白的表達(dá)。采用基因轉(zhuǎn)染和TREK-

4、1通道特異性的抑制劑探討在TREK-1過(guò)度表達(dá)或被阻斷狀態(tài)下，海馬神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化和凋亡狀況。(2)通過(guò)CCK-8檢測(cè)不同濃度地塞米松和氟西汀對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞活力的影響，獲取最適作用濃度。采用Real-timePCR和Westernblotting檢測(cè)地塞米松或氟西汀對(duì)海馬神經(jīng)干細(xì)胞TREK-1基因和蛋白表達(dá)的影響。采用BrdU摻入標(biāo)記法檢測(cè)地塞米松或氟西汀對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響。(3)應(yīng)用慢性不可預(yù)知的溫和應(yīng)激建立抑郁模型，分為

5、對(duì)照組、對(duì)照+艾司西酞普蘭組、CUMS組和CUMS+艾司西酞普蘭組，采用體重稱量、糖水偏好實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠行為學(xué)改變。通過(guò)Real-timePCR和Westernblotting分別檢測(cè)各組大鼠海馬和前額TREK-1基因和蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:(1)在原代培養(yǎng)的胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞中首次證實(shí)了雙孔鉀離子通道TREK-1的存在與高表達(dá)。TREK-1抑制劑布比卡因和姜黃對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的活性有濃度依賴性的促進(jìn)作用

6、，50μM布比卡因和0.5μM姜黃可顯著促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，基因轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)TREK-1，神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力顯著下降。與對(duì)照組相比，50μM濃度布比卡因或TREK-1過(guò)表達(dá)狀態(tài)下，神經(jīng)干細(xì)胞的分化、凋亡均無(wú)顯著變化。(2)地塞米松對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的活性有濃度依賴性的抑制作用。1μM濃度地塞米松可顯著增加神經(jīng)干細(xì)胞TREK-1基因和蛋白的表達(dá)。1μM濃度地塞米松可顯著抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，100μM布比卡因可逆轉(zhuǎn)上述抑制作用。1μM濃度氟西汀

7、可顯著促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、緩解地塞米松對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的抑制作用。1μM濃度氟西汀可顯著降低神經(jīng)干細(xì)胞TREK-1基因和蛋白的表達(dá)，顯著緩解地塞米松引起的TREK-1基因和蛋白表達(dá)的增加。(3)應(yīng)激6周后，與對(duì)照組相比，CUMS組體重、糖水偏好顯著降低，漂浮不動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)，水迷宮潛伏期延長(zhǎng)，站臺(tái)穿越次數(shù)及站臺(tái)所在象限活動(dòng)時(shí)間顯著減少;與CUMS組相比，CUMS+艾司西酞普蘭組上述抑郁樣行為顯著改善。慢性應(yīng)激可顯著降低海馬TREK-1