自體血清在兔皮膚創(chuàng)面愈合中的作用研究.pdf

1、目的：建立新西蘭大白兔皮膚缺損的創(chuàng)傷模型，創(chuàng)面外用兩種不同濃度的自體血清，通過觀察創(chuàng)面愈合時間、創(chuàng)面愈合率及創(chuàng)面中毛細(xì)血管生成數(shù)量，檢測新生肉芽組織中CD34、VEGF、bFGF陽性細(xì)胞表達(dá)的變化規(guī)律，初步探討自體血清對兔皮膚創(chuàng)面愈合作用。
　　方法：將24只新西蘭大白兔（雌雄不限，體重2.5~3.0 kg）制作皮膚缺損創(chuàng)傷模型，每只兔背部皮膚制備3個創(chuàng)面，分別采用40％自體血清（A組）、60%自體血清（B組）、0.9%生理鹽水（

2、C組）覆蓋創(chuàng)面，隔日常規(guī)清創(chuàng)換藥。其中12只新西蘭大白兔背部共36個創(chuàng)面分別在術(shù)后4d、8d、12d通過創(chuàng)面愈合率評價治療效果；其余12只兔分別于術(shù)后4d、8d、12d在創(chuàng)面新生肉芽組織的不同位置切取組織標(biāo)本，石蠟包埋切片后行常規(guī)HE染色和免疫組化檢測。采用免疫組化方法檢測CD34以觀察毛細(xì)血管密度，光學(xué)顯微鏡下觀察組織切片，高倍鏡（400×）下觀察計(jì)數(shù)5個視野毛血管數(shù)量，對比各組切片中毛細(xì)血管數(shù)量差異。采用免疫組化方法檢測VEGF和b

3、FGF陽性細(xì)胞的表達(dá)，在高倍光學(xué)顯微鏡下觀察切片，每張切片在肉芽組織及皮膚層隨機(jī)選取5個不連續(xù)的視野，用Axio Vision顯微圖像采集系統(tǒng)拍攝圖片，通過醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對免疫組化結(jié)果分別進(jìn)半定量分析。
　　結(jié)果：1、創(chuàng)面大體觀察：術(shù)后4d，A、B、C三組創(chuàng)面均無感染，有紅腫和滲液，且肉芽組織增生均不明顯；術(shù)后8d，A、B兩組創(chuàng)面濕潤無感染，肉芽組織明顯增多，創(chuàng)緣有新生上皮。C組肉芽組織生長較少，部分創(chuàng)面仍有紅腫、滲出；術(shù)后12

4、d，A組部分創(chuàng)面仍有少許滲液，但肉芽組織飽滿、鮮嫩、呈顆粒狀;B組肉芽組織基本與創(chuàng)緣持平并絕大部分基本被上皮覆蓋，僅有少許殘留創(chuàng)面；C組創(chuàng)面收縮及創(chuàng)面明顯變淺，部分創(chuàng)面仍有滲出但無明顯紅腫，肉芽組織明顯增生，創(chuàng)緣有新生上皮形成。
　　2、創(chuàng)面愈合時間：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示創(chuàng)面愈合時間最短的為12.5d，最長為19.5d，A組創(chuàng)面愈合時間13.67士0.77d，B組創(chuàng)面愈合時間13.38士0.74d，C組創(chuàng)面愈合時間17.45士1.03d，

5、而B組略高于A組，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。A、B兩組與C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3、創(chuàng)面愈合率：術(shù)后4d，A、B、C三組愈合率比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；術(shù)后8d和12d，A、B兩組創(chuàng)面愈合率均高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而B組略高于A組，但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4、組織切片HE染色后觀察：術(shù)后4d，A組創(chuàng)面組織中有較多炎癥細(xì)胞浸潤，并有表皮細(xì)胞、成

6、纖維細(xì)胞增殖及新生毛細(xì)血管形成。B組創(chuàng)面組織中各種炎癥細(xì)胞和表皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞及新生毛細(xì)血管的含量更加豐富。C組創(chuàng)面組織僅少量炎癥細(xì)胞，毛細(xì)血管和上皮細(xì)胞增生不明顯；術(shù)后8d，A組有大量毛細(xì)血管形成與成纖維細(xì)胞增生，膠原開始形成，并有少許上皮細(xì)胞增生。B組較其它兩組在創(chuàng)面創(chuàng)緣表皮細(xì)胞增殖方面更明顯，毛細(xì)血管、纖維細(xì)胞和膠原更多，炎癥細(xì)胞減少。C組僅少量成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞與上皮細(xì)胞增生；術(shù)后12d，A、B兩組新生表皮細(xì)胞已覆蓋創(chuàng)面，且

7、明顯角質(zhì)化，創(chuàng)面組織中大部分成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為纖維細(xì)胞，細(xì)胞間有大量排列紊亂的膠原形成。而 C組炎癥細(xì)胞減少，成纖維細(xì)胞增殖尚較活躍，纖維細(xì)胞少，創(chuàng)面未完全上皮化。
　　5、毛細(xì)血管密度比較：組織切片經(jīng)CD34免疫組化染色觀察表明，術(shù)后4d，A、B、C三組創(chuàng)面的毛細(xì)血管密度比較，結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；術(shù)后8d和12d，A、B兩組的毛細(xì)血管密度均高于C組，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,（P<0.05），A、B兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

8、P>0.05）。
　　6、免疫組織化學(xué)法bFGF、VEGF表達(dá)檢測：術(shù)后4d，A、B、C三組bFGF、VEGF含量均逐步上升，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；術(shù)后8d，A、B兩組bFGF、VEGF陽性細(xì)胞數(shù)量明顯高于C組，有顯著性差異（P<0.05或P<0.01）；術(shù)后12d，A、B兩組bFGF、VEGF陽性細(xì)胞數(shù)量仍高于C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），A組與B組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：40%