富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體對(duì)兔皮膚手術(shù)切口愈合的影響.pdf

1、目的:
　　如何能夠最大限度減少瘢痕形成、提高手術(shù)切口愈合質(zhì)量是現(xiàn)代創(chuàng)傷修復(fù)的研究熱點(diǎn)。皮膚傷口愈合是繁雜而有序的生物學(xué)過(guò)程，各種生長(zhǎng)因子在其中發(fā)揮重要作用。來(lái)自于自體靜脈血的富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白（Concentrated Growth Factors，CGF）由于其含有大量、多種生長(zhǎng)因子，在組織創(chuàng)傷修復(fù)中發(fā)揮著重要作用。本研究通過(guò)于新西蘭大耳白兔皮膚切口邊緣注射富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體，應(yīng)用組織病理學(xué)及形態(tài)計(jì)量學(xué)方法，探討C

2、GF液體對(duì)皮膚切口愈合的影響，為CGF液體在臨床上應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
　　雄性新西蘭大白兔12只，12周齡，體重2.5 kg-2.8 kg。實(shí)驗(yàn)采用自身對(duì)照設(shè)計(jì)，每只動(dòng)物背部6個(gè)切口，按手術(shù)切口處理分為3組:A組:(CGF2次組)中部切口，術(shù)后注射CGF2次;B組:（CGF1次組）前部切口，術(shù)后注射CGF1次;C組:（空白對(duì)照組）后部切口，術(shù)后不做任何處理。共72個(gè)切口。
　　

3、2、富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體制備
　　術(shù)前于兔耳緣靜脈穿刺，以9 ml專門用于制取富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體的真空負(fù)壓采血管采取動(dòng)物靜脈血約9 ml，制備富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體，5 ml粘膜注射針吸取離心管中段約4 ml富自體生長(zhǎng)因子纖維蛋白液體備用。
　　3、手術(shù)過(guò)程
　　全麻下于動(dòng)物脊柱兩側(cè)旁開(kāi)2 cm處，平行脊柱做6個(gè)長(zhǎng)約2 cm皮膚切口，前、中、后切口間間隔2 cm。切開(kāi)皮膚、皮下組織，深達(dá)肌層。A組、B

4、組切口縫合前于切口兩側(cè)創(chuàng)緣旁1mm處皮下注射CGF液1 ml,間斷縫合切口;C組:切口不作處理，直接間斷縫合。A組術(shù)后1周，制備CGF液體，同法再次注射。術(shù)后抗感染治療。一周后拆除縫合線。
　　4、標(biāo)本采集及處理
　　分別于術(shù)后1周、2周、3周、4周，隨機(jī)抽取3只動(dòng)物，全麻下距切口兩側(cè)各0.5 cm，切取2×1 cm2全層皮膚及皮下組織，立即置入10％甲醛溶液固定。
　　5、大體觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4

5、周，動(dòng)物標(biāo)本采集前觀察傷口情況并記錄。
　　6、HE染色組織學(xué)觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4周，10％甲醛溶液固定的組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下組織學(xué)觀察:真皮層，表皮層及切口兩側(cè)炎細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠原的情況
　　7、苦味酸-天狼星紅染色組織學(xué)觀察
　　分別于術(shù)后1、2、3、4周，10％甲醛溶液固定的組織標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋切片，苦味酸-天狼星紅染色，偏振光顯微鏡下觀察:切口兩側(cè)膠原纖維形成情

6、況。采用Image Pro-Plus6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)對(duì)創(chuàng)口皮膚中總膠原含量，Ⅰ/Ⅲ型膠原比例進(jìn)行測(cè)定。
　　8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（(x)±s），SNK-q檢驗(yàn)組間兩兩比較，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、大體觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組:傷口愈合良好，表面清潔，部分縫線脫落，輕微縫線反應(yīng);C組:部分傷口表面有結(jié)痂覆蓋

7、，部分縫線脫落，傷口處皮膚顏色發(fā)紅，部分傷口縫線反應(yīng)較重。
　　術(shù)后2周，A組，傷口愈合良好，平整，與周圍組織界限不清;B組傷口稍凹陷;C組傷口凹陷，愈合線明顯，與周圍正常組織界限清晰。
　　術(shù)后3周、4周，A組、B組:切口線細(xì)膩不清晰;C組:切口線處無(wú)毛發(fā)生長(zhǎng)，愈合線仍較清晰可見(jiàn)。
　　2、光鏡觀察
　　2.1 HE染色組織學(xué)觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組:皮膚全層愈合，表皮層角化不明顯，棘細(xì)胞層未見(jiàn)明顯

8、增生，基底層完整，基底細(xì)胞排列整齊，成纖維細(xì)胞排列疏松較規(guī)則，胞體較大，核仁圓形，少量炎細(xì)胞浸潤(rùn);C組:角化明顯，棘細(xì)胞層增生，真皮未完全愈合，成纖維細(xì)胞胞體較小，可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　術(shù)后2周，A、B、C3組皮膚全層均已愈合。A組，表皮層基本平坦，與周圍正常組織相近，成纖維細(xì)胞數(shù)量多，核仁較大，形成纖維束細(xì)小，與切口線近平行，向周圍正常組織膠原排列移形，愈合線變窄;B組，表皮稍凹陷，角化不重，新生膠原束較細(xì)小，排列相對(duì)疏松，緊鄰

9、表皮層處排列接近正常組織，成纖維細(xì)胞相對(duì)密集;C組，表皮有凹陷，角化明顯，新生膠原顏色較淡，與愈合線呈垂直排列，有炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　術(shù)后3周、4周，A組，B組，成纖維細(xì)胞數(shù)量減少，膠原排列與周圍正常組織相近;C組，角化較重，膠原排列成束，致密。
　　2.2膠原纖維苦味酸-天狼星紅染色組織學(xué)觀察
　　術(shù)后1周，A組、B組，切口兩側(cè)新生膠原以綠色細(xì)小Ⅲ型膠原為主;C組切口兩側(cè)紅黃色Ⅰ型膠原相對(duì)較多，黑色區(qū)域較多。
　

10、　術(shù)后2周，A組切口周圍可見(jiàn)大量綠色Ⅲ型膠原;B組綠色Ⅲ型膠原相對(duì)較少;C組以紅黃色Ⅰ型膠原為主。
　　術(shù)后3周、4周，A組、B組以綠色Ⅲ型膠原為主，膠原排列接近正常組織，膠原束細(xì)小;C組，切口兩側(cè)可見(jiàn)紅黃色Ⅰ型膠原，排列紊亂。
　　3、膠原纖維定量分析結(jié)果
　　3.1總膠原含量比較（以(x)±s表示）
　　術(shù)后1周，A組:62.97±1.29;B組:62.97±1.21;C組:56.34±1.31。A組與C組，

11、B組與C組總膠原含量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），A組與B組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　術(shù)后2周，A組:70.90±1.26;B組:69.80±1.29;C組:67.26±0.72。A組B組C組三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　術(shù)后3周、4周，C組＞B組＞A組，A、B、C三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　3.2Ⅰ/Ⅲ型膠原纖維比值比較（以(x)±s表示）
　　術(shù)后1周，A

12、組:0.245±0.084;B組0.245±0.085;C組:0.399±0.081。A組與C組，B組與C組Ⅰ/Ⅲ型膠原纖維比值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;A組與B組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　術(shù)后2、3、4周，C組＞A組＞B組，A組B組C組三組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、CGF液體可促進(jìn)手術(shù)切口愈合，減輕炎癥反應(yīng)。
　　2、CGF液體在創(chuàng)傷早期可增加手術(shù)切口局部