皮膚老化小鼠皮膚衰老的發(fā)病機(jī)制及核桃仁水提物的治療作用.pdf

1、皮膚衰老(Skin aging)是人體最常見的老化現(xiàn)象，臨床表現(xiàn)為皮膚干燥、變薄、皺紋增多等，直接影響人的外觀和健康，誘發(fā)一系列的心理與社會問題。因此，預(yù)防和延緩皮膚衰老成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點與焦點之一。目前關(guān)于皮膚衰老的發(fā)病機(jī)制尚不明確，治療手段與方法亦不成熟，因而需要深入探討其發(fā)病的分子機(jī)制，為延緩皮膚衰老藥物的研發(fā)提供實驗依據(jù)。
　　 目的:
　　 1.研究核桃仁水提物對皮膚老化小鼠皮膚病理形態(tài)、厚度和含水量的影響

2、。探討核桃仁水提物對皮膚老化小鼠皮膚膠原纖維的影響。
　　 2.研究核桃仁水提物對皮膚老化小鼠皮膚細(xì)胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 1.采用5％D-半乳糖(D-gal)頸背皮下注射和紫外線(UV)照射聯(lián)合建立衰老小鼠模型，并連續(xù)灌胃核桃仁水提物(WWE)30 d。運(yùn)用肉眼觀察、HE染色、皮膚厚度及含水量測定方法觀察核桃仁提取物對皮膚老化小鼠皮膚病理形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。

3、
　　 2.利用Masson三色染色法觀察皮膚膠原纖維形態(tài)變化，用生化法測定皮膚組織中羥脯氨酸(Hyp)含量，免疫組織化學(xué)染色和Western Bloting方法檢測核桃仁水提物對皮膚老化小鼠皮膚細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)表達(dá)的影響。
　　 3.免疫組織化學(xué)、免疫熒光方法以及Western Bloting技術(shù)檢測核桃仁水提物對皮膚老化小鼠皮膚細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表達(dá)的影響。
　　

4、 結(jié)果:
　　 1.D-半乳糖頸背皮下注射聯(lián)合UV照射40天后，與正常組相比，模型組小鼠皮膚粗糙，無光澤，表皮與真皮界限不清楚，厚度變薄，含水量明顯下降。核桃仁水提物治療后，用藥組小鼠皮膚變細(xì)膩，皺紋減少，表皮與真皮界線較清楚，同時表皮厚度有明顯增加，而真皮也都相應(yīng)增厚（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01），含水量亦顯著上升，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.05、 P＜0.01）。
　　 2.與正常組

5、比較，模型組膠原纖維厚度變薄，排列松散，Hyp含量明顯減少，而MMP9表達(dá)增強(qiáng)。與模型組比較，核桃仁水提物中、高劑量組均能使膠原纖維厚度增加，排列緊密，同時Hyp含量顯著升高，MMP9陽性細(xì)胞率及MMP9/β-actin OD比值均明顯減少。
　　 3.免疫組化及免疫熒光法檢測皮膚衰老小鼠皮膚細(xì)胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá):與正常組比較，模型組小鼠皮膚細(xì)胞中Bax蛋白陽性細(xì)胞率明顯增加，Bcl-2蛋白陽性

6、細(xì)胞率顯著減少，引起B(yǎng)cl-2/Bax比值同步降低，而Caspase-3蛋白的陽性細(xì)胞率明顯增加。與模型組相比，核桃仁水提物低、中、高劑量組皮膚中Bax蛋白陽性細(xì)胞率明顯降低，而Bcl-2蛋白陽性細(xì)胞率顯著提高，導(dǎo)致Bcl-2/Bax比值相應(yīng)增大，而各治療組小鼠皮膚中Caspase-3蛋白陽性細(xì)胞率均明顯減少。
　　 4.Western Bloting檢測皮膚衰老小鼠皮膚細(xì)胞中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá):與

7、正常組相比，模型組小鼠皮膚中Bax/β-actin OD比值顯著升高，而Bcl-2/β-actin OD比值明顯減小，同時Caspase-3/β-actin OD比值增大。與模型組比較，各治療組中Bax/β-actin OD比值均明顯降低（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01），核桃仁水提物中、高劑量組皮膚細(xì)胞中Bcl-2/β-actin OD比值明顯提高，低劑量組的改變只有變化的趨勢，并且中高劑量組皮膚中Bcl-2/Bax OD比

8、值提高，而低劑量組Bcl-2/Bax OD比值變化不明顯。此外，各治療組小鼠皮膚細(xì)胞中Caspase-3/β-actin OD比值較模型組明顯降低。
　　 結(jié)論:
　　 1.利用頸背皮下注射D-gal聯(lián)合UV照射建立皮膚衰老動物模型，研究自由基代謝紊亂對皮膚老化的影響，具有一定科學(xué)性和創(chuàng)新特點。
　　 2.核桃仁水提物對皮膚衰老小鼠皮膚膠原纖維具有保護(hù)作用，其機(jī)制與增加Hyp合成、抑制MMP9蛋白表達(dá)有關(guān)