核桃仁抗氧化、降血壓作用及提取工藝研究.pdf

1、核桃(Juglans regia L.)系被子植物門雙子葉植物綱胡桃科核桃屬植物。所含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，具有較好的抗氧化、抗衰老、提高免疫力等作用。核桃在我國(guó)栽培廣泛，資源也非常豐富。本文主要采用體內(nèi)、外活性評(píng)價(jià)方法，綜合評(píng)價(jià)核桃仁提取物、脫脂核桃粉提取物及核桃油的抗氧化、降血壓作用，及基于抗氧化、降血壓活性的提取工藝研究。具體研究工作如下：
　　采用鐵離子還原能力(FRAP)、DPPH自由基清除能力及ABTS自由基清除能力3種不同的

2、體外抗氧化方法來(lái)綜合評(píng)價(jià)核桃不同部位的體外抗氧化作用。三種不同抗氧化評(píng)價(jià)方法呈現(xiàn)的抗氧化能力趨勢(shì)一致，體外抗氧化作用：核桃油<核桃仁提取物<脫脂核桃粉提取物。為評(píng)價(jià)核桃不同部位的體內(nèi)抗氧化作用，通過(guò)對(duì)小白鼠的灌胃和造衰老模型飼養(yǎng)42天，腹腔注射D-半乳糖造模的小白鼠為模型組，造模同時(shí)給藥，維C陽(yáng)性對(duì)照組(劑量為0.2g kg-1 d)、核桃仁提取物組(劑量為0.5g kg-1 d)、脫脂核桃粉提取物組(劑量為0.2g kg-1 d)和核

3、桃油組(劑量為2g kg-1 d)。42天后測(cè)定小白鼠血清、腎臟、腦、肝臟和心臟中谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-PX)活力、過(guò)氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與空白組相比，模型組小鼠血清、肝組織、腦組織、腎組織和心臟組織中 MDA含量明顯升高，說(shuō)明氧化損傷模型成功；三個(gè)不同部位核桃提取物組和模型組相比，均能不同程度地降低組織和血清中 MDA的含量；同時(shí)，也能不

4、同程度地升高組織和血清的總抗氧化能力(T-AOC)以及提高SOD、CAT、GSH-PX酶的活力。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，核桃仁組、核桃油組和脫脂核桃粉組組間抗氧化活性無(wú)顯著性差異(P>0.05)，都具有較好的體內(nèi)抗氧化作用。綜合體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核桃仁三部位提取物均能提高抗氧化酶的活力和降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物的含量，能清除過(guò)多的自由基，體現(xiàn)了較好的抗氧化作用。
　　由于脫脂核桃粉部位體現(xiàn)了較好的體內(nèi)抗氧化作用。以脫脂核桃粉為原料，以DPPH

5、自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和FRAP鐵離子還原能力的Trolox等價(jià)抗氧化能力（TEAC，μM）以及提取物多酚含量(Total Polyphenols，mg/g)為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過(guò)對(duì)抗氧化物質(zhì)的提取方法和提取溶劑進(jìn)行篩選，對(duì)影響回流提取的三個(gè)因素(乙醇濃度、提取溫度和提取時(shí)間)進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)，從而得到了適合選定響應(yīng)面設(shè)計(jì)的各因素范圍。通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化提取脫脂核桃粉抗氧化活性和總多酚最佳工藝參數(shù)為：乙醇濃度為57.67％，提

6、取溫度為47.81℃，提取時(shí)間為76.91min。
　　由于核桃油部位具有較好的體內(nèi)抗氧化作用。以核桃油的提取率為指標(biāo)，對(duì)核桃油的提取方法和提取溶劑進(jìn)行篩選，對(duì)影響回流提取的三個(gè)因素(液料比、提取溫度和提取時(shí)間)進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)，從而得到了適合選定響應(yīng)面設(shè)計(jì)的各因素范圍。通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化核桃油提取工藝參數(shù)為：提取時(shí)間69.98min、提取溫度45℃、液料比為11.25:1mL g-1。
　　建立了一種同時(shí)測(cè)定核桃油中三種不飽和

7、脂肪酸的含量測(cè)定方法，此法簡(jiǎn)單、選擇性高。色譜分析使用ZORBAX Eclipse XDB-C8色譜柱(4.6×150mm,5μm)，流動(dòng)相組成為乙腈：水（90:10），等度洗脫，流速為1 mL min-1。此法線性范圍良好(γ>0.9992)，日間和日內(nèi)精密度都小于3.0%，表明方法對(duì)于定量測(cè)定核桃油中的不飽和脂肪酸有好的重現(xiàn)性。建立的方法獲得了滿意的準(zhǔn)確性和精密性。
　　用HPLC為檢測(cè)手段，馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)為

8、反應(yīng)底物，ACE作為反應(yīng)用酶，反應(yīng)所生成的馬尿酸為檢測(cè)指標(biāo)，未加酶抑制劑的反應(yīng)為空白對(duì)照，卡托普利為陽(yáng)性對(duì)照，應(yīng)用本方法比較核桃體外降血壓作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，脫脂核桃粉乙醇提取物具有較好的體外降血壓作用。為了研究核桃不同部位提取物體內(nèi)降血壓作用，通過(guò)給大鼠飲用10%果糖水來(lái)造高血壓模型，造模的同時(shí)給藥，卡托普利陽(yáng)性對(duì)照組(劑量為0.10g kg-1 d)+10%果糖水、核桃仁提取物組(劑量為0.25g kg-1 d)+10%果糖水、脫脂

9、核桃粉提取物組(劑量為0.10g kg-1 d)+10%果糖水和核桃油組(劑量為1.00g kg-1 d)+10%果糖水。給藥和飲用果糖水四周，每周測(cè)定一次大鼠尾動(dòng)脈血壓。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，造高血壓大鼠模型四周后，與空白組相比，模型組的大鼠血壓顯著升高，給藥組和模型組相比，脫脂核桃粉組能顯著降低高血壓大鼠的血壓。綜合體內(nèi)、外研究結(jié)果，脫脂核桃粉提取物的降血壓作用最好。
　　以脫脂核桃粉提取物ACE抑制率為指標(biāo)，通過(guò)對(duì)ACE抑制劑的提取