牛羊混合膽汁中有效成分的提取純化及GCA在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)研究.pdf

1、本文在實驗室提取純化牛羊混合膽汁中有效成分工藝的基礎(chǔ)上，通過改進(jìn)和完善工藝、擴(kuò)大試驗規(guī)模，建立了一套穩(wěn)定、可靠的從牛羊混合膽汁中提取分離天然?；撬帷⒛懰?、甘氨膽酸及?；悄懰岬男≡嚬に嚰夹g(shù)路線，并對提取過程中廢棄的的原料及試劑進(jìn)行了回收套用研究，同時開展了有效成分甘氨膽酸在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究。旨在為下一步開展從牛羊混合膽汁中提取有效成分的中試實驗研究奠定試驗基礎(chǔ)，為牛羊膽汁的綜合開發(fā)利用提供可靠的理論依據(jù)和可能性，同時為闡明甘氨膽酸

2、在大鼠血清及組織中的分布和變化規(guī)律，開發(fā)臟器生化藥物新資源提供線索。 提取?；撬岬男≡嚬に囇芯坎捎妹摰鞍?、除色素、堿解酸化等方法開展了從牛羊混合膽汁中提取天然?；撬岬男≡嚬に囇芯?。采用紙層析法和紅外光譜掃描法對提取物進(jìn)行定性檢測，試驗結(jié)果證明提取樣品與?；撬針?biāo)準(zhǔn)品顯色斑點Rf值相同，紅外光譜特征吸收峰一致，表明提取出的樣品為?；撬?；采用薄層掃描法測定其含量，結(jié)果證明其純度平均達(dá)98.6％；測定了方法回收率，結(jié)果表明?；撬崽崛×科?/p>

3、均達(dá)13.1g/L，回收率平均達(dá)86.7％，這與實驗室工藝提取?；撬岬慕Y(jié)果一致，表明該提取工藝穩(wěn)定、可靠。提取膽酸、甘氨膽酸、?；悄懰岬男≡嚬に囇芯坎捎妹摰鞍?、除色素、萃取、柱層析分離等方法開展了從牛羊混合膽汁中分離、提取和純化膽酸、甘氨膽酸及牛磺膽酸三種有效成分的小試提取工藝研究。采用正交試驗篩選了柱層析最佳條件，以容積為10L的層析柱進(jìn)行分離純化，固定相為硅膠，流動相為氯仿和正丁醇混合溶劑，一次裝樣量3000mL膽汁，流動相采用梯度

4、洗脫，先按4：1比例分離膽酸和甘氨膽酸，然后按3：2比例分離甘氨膽酸和牛磺膽酸，流動相洗脫速度為3～5mL/s。采用薄層層析法和紅外光譜掃描法對提取物進(jìn)行定性檢測，結(jié)果證明三種提取樣品分別與膽酸、甘氨膽酸及?；悄懰針?biāo)準(zhǔn)品顯色斑點Rf值相同，紅外光譜特征吸收峰均一致，表明提取出的三種樣品分別為膽酸、甘氨膽酸、牛磺膽酸結(jié)晶體。采用薄層掃描法測定其含量，結(jié)果證明三種成分平均純度分別達(dá)98.0％、98.4％、98.6％。首次測定了方法回收率，結(jié)

5、果顯示三種成分提取量平均分別達(dá)11.0g/L、9.1g/L、9.3g/L，回收率平均達(dá)64.4％、63.7％、67.8％，這與實驗室工藝提取三種有效成分結(jié)果一致，表明小試提取工藝穩(wěn)定、可行。采用留樣觀察法研究了不同批次的三種有效成分在室溫環(huán)境和4℃封閉避光環(huán)境下的穩(wěn)定性，結(jié)果表明，三種白色粉末樣品在室溫環(huán)境中均不穩(wěn)定，易受潮變質(zhì)，在4℃封閉避光環(huán)境下均具有較高的穩(wěn)定性，不易變質(zhì)。廢舊原料、試劑的回收套用研究采用精餾法回收了提取工藝中的廢

6、舊乙醇，試驗結(jié)果表明回收乙醇純度平均達(dá)95％以上，符合提取工藝純度要求：采用堿洗、酸洗及去離子水洗滌等方法對廢舊硅膠進(jìn)行了回收，結(jié)果表明回收硅膠物理性狀與新硅膠無差異，pH值相同；將回收乙醇和硅膠重新套用到提取工藝中，結(jié)果證明提取效果與新乙醇、硅膠提取效果無顯著差異，表明使用回收乙醇和硅膠不影響對四種有效成分的提取效果，可以重復(fù)利用。甘氨膽酸在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究采用固相萃取—反相高效液相色譜法測定了大鼠血清及肝、腎、腦組織中甘氨膽

7、酸的含量。結(jié)果表明，在0.15625～10.0μg/ml范圍內(nèi)血清中甘氨膽酸濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y=39579X+57823，R2=0. 9984；以信噪比S/N=3為標(biāo)準(zhǔn)，最低檢測濃度為0.021μg/ml；平均回收率為98.49％；日內(nèi)RSD為0.52％～2.00％，日間RSD為0.74％～4.98％；穩(wěn)定性試驗第一組的平均含量為99.35％，RSD為2.24％，第二組的平均含量為100. 87％，RSD為4.73

8、％：測定了肝、腎、腦組織中甘氨膽酸含量，采用體外甘氨膽酸標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法計算了相應(yīng)的組織濃度，其結(jié)果僅反映組織中甘氨膽酸濃度的相對變化規(guī)律，不能體現(xiàn)真正的組織濃度值，但對組織樣品的穩(wěn)定性進(jìn)行了較細(xì)致的考察，其結(jié)果和血樣結(jié)果基本一致。該方法具有簡便、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、實用的特點，適用于甘氨膽酸含量的分析。采用固相萃取一反相高效液相色譜法測定了給藥后不同時間血清及肝、腎、腦組織中甘氨膽酸的濃度。結(jié)果顯示：（1）在血清中符合一級吸收二室模型

9、，藥動學(xué)方程：C= 41.17e-1.256t+84.7 e—0.491t-125.87e—0.667t。（2）在肝臟中符合一級吸收一室模型，藥動學(xué)方程：C=18.734（e—0.042t—e—0.733t）。（3）在腎臟中符合一級吸收一室模型，藥動學(xué)方程：C=105.88（e—0.076t．e—0.081t）。（4）在腦組織中符合一級吸收一室模型，藥動學(xué)方程：C=5.312（e—o．082t—e 0.098t）。結(jié)果表明，甘氨膽酸口服