蛇床子素在大鼠原代肝細胞中代謝的研究.pdf

1、目的: 采用大鼠原代肝細胞體外溫孵液對蛇床子素(Ost)在肝細胞中代謝轉化過程進行研究。分析Ost在大鼠肝細胞中的代謝途徑和機制，探討Ost在CYP450酶系相關亞型中的代謝，及CYP450酶誘導劑和抑制劑對Ost代謝的影響。為更深入地研究Ost的藥動學及其臨床上合理用藥提供理論和實驗依據。 方法: ①建立大鼠原代肝細胞的分離方法和大鼠肝細胞體外溫孵體系。通過臺盼藍排斥實驗、光學顯微鏡、透射電鏡檢查、HE染色對肝

2、細胞的產率，活力，細胞的形態(tài)、超微結構等指標進行測定。 ②通過MTT方法測定不同濃度Ost對大鼠原代肝細胞活力的影響。 ③建立Ost的HPLC-UV檢測方法。 ④通過溫孵時間、肝細胞含量、底物濃度三個方面來考察Ost在大鼠肝細胞體外溫孵液中的酶促動力學特征。 ⑤研究CYP3A4誘導劑利福平(Rif)、CYP2D6抑制劑育亨賓(Yoh)、CYP2C9抑制劑磺胺嘧啶(Sul)、CYP2C8抑制劑槲皮素(Que

3、)對Ost在大鼠肝細胞溫孵液中代謝的影響。 ⑥選擇CYP3A4特異性抑制劑醋竹桃霉素(Tro)，觀察其對Ost體外代謝的抑制效應。 結果: ①建立了成熟的大鼠原代肝細胞的分離方法和大鼠原代肝細胞溫孵體系，肝細胞產率為1-2 × 108/肝，肝細胞活力和純度均在90％以上。 ②Ost的濃度在0-20μM范圍內對大鼠原代肝細胞活力與空白對照組相比，未見顯著影響，肝細胞活力＞80％。 ③Ost的HPLC

4、檢測方法為流動相：甲醇：雙蒸水=80:20(V/V)；流速：1.0ml/min；檢測波長：322nm;靈敏度：0.004 Aufs。 ④Ost在大鼠肝細胞體外溫孵液中呈現明顯的酶促動力學特征：當Ost的濃度在0-10μM，Ost的代謝呈濃度依賴性，代謝消除量隨底物濃度增加呈線性增加；當濃度超過10μM，Ost代謝出現飽和現象，代謝消除量不再隨著底物濃度的增加而增加。Ost在大鼠肝細胞體外溫孵液中經37℃空氣浴振蕩器振蕩孵育15～

5、120min，呈時間依賴性線性消除。溫孵液中肝細胞的濃度在5 × 105～1×107/ml范圍內，Ost的代謝量隨肝細胞濃度增加而增加，呈線性消除。⑤CYP2D6抑制劑Yoh、CYP2C9抑制劑Sul、CYP2C8抑制劑Que對Ost的代謝消除率的影響與對照組相比無明顯區(qū)別(P＞0.05)，在與CYP3A4誘導劑Rif共孵育的肝細胞溫孵液中Ost的代謝消除率與對照組相比具有顯著性差異(P＜0.05)。 ⑥CYP3A4抑制劑Tro

6、呈劑量依賴性抑制Ost在大鼠肝細胞中的代謝。 結論: 本實驗建立的大鼠原代肝細胞分離方法和肝細胞體外溫孵液穩(wěn)定、可靠，能滿足本實驗藥物代謝的要求。Ost在大鼠肝細胞體外溫孵液代謝實驗研究提示Ost的代謝具有酶促動力學代謝特征。CYP2D6抑制劑Yoh、CYP2C9抑制劑Sul、CYP2C8抑制劑Que不抑制Ost在大鼠肝細胞體外溫孵液中的代謝。CYP3A4誘導劑Rif則明顯誘導Ost的代謝；CYP3A4抑制劑Tro呈劑量