烏頭類中藥雄性大鼠生殖毒性體內(nèi)外試驗(yàn)研究.pdf

1、烏頭類中藥是藥典收錄的一類常用藥物，中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為烏頭類中藥具有祛風(fēng)除濕，溫經(jīng)止痛的功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明其具有鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗炎、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用，臨床應(yīng)用前景十分廣泛。但該類藥物毒性大，其中生川烏、生草烏、生附子屬于國(guó)家特殊管理的毒性中藥。烏頭類中藥的主要毒性成分為烏頭堿，中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)是其毒性作用的主要靶器官。而關(guān)于其是否具有雄性生殖毒性，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均未見(jiàn)相關(guān)研究報(bào)道。 為了解烏頭類中藥對(duì)雄性生殖系

2、統(tǒng)的影響，本課題選用三種具有代表性的烏頭類中藥鹽附子、生川烏、生草烏及其主要毒性成分烏頭堿，采用大鼠體內(nèi)試驗(yàn)和大鼠睪丸支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系從體內(nèi)和體外兩方面評(píng)價(jià)其雄性生殖毒性及作用機(jī)制。 大鼠體內(nèi)試驗(yàn)中的雄性生殖毒性研究采用SD大鼠，設(shè)鹽附子1.55、3.09、6.18g生藥/kg，生川烏3.3、6.5、13.0g生藥/kg，生草烏2.1、4.2、8.3g生藥/kg及蒸餾水對(duì)照組，連續(xù)給藥3個(gè)月，停藥恢復(fù)觀察1個(gè)月。結(jié)果顯

3、示：給藥結(jié)束時(shí)各劑量組的睪丸和附睪的臟器系數(shù)均較對(duì)照組有所下降，且生草烏高劑量組(8.3g生藥/kg)所出現(xiàn)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，恢復(fù)期各劑量組的睪丸和附睪的臟器系數(shù)與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，給藥結(jié)束時(shí)和恢復(fù)期結(jié)束時(shí)烏頭類中藥各劑量組睪丸未見(jiàn)明顯的組織病理學(xué)改變。 烏頭堿對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞(Sertoli細(xì)胞)毒性研究采用18～20日齡SD大鼠，通過(guò)Tris-Hcl低滲處理進(jìn)行細(xì)胞純化，采用H

4、.E.染色、瑞氏-吉姆薩染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。用MTT‘法檢測(cè)濃度為0、5×10<'1>、5×10<'2>、5×10<'3>、5×10<'4>ng/ml的烏頭堿對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞活力的影響，并用乳酸試劑盒檢測(cè)烏頭堿對(duì)支持細(xì)胞乳酸分泌功能的影響。結(jié)果顯示：與溶劑對(duì)照組(DMSO)相比，48h時(shí)，高劑量烏頭堿(5×10<'3>、5×10<'4>ng/ml)抑制支持細(xì)胞的增殖(P<0.01)，低劑量烏頭堿(5×10<'2>ng/ml)表現(xiàn)出對(duì)支持

5、細(xì)胞增殖有輕微促進(jìn)作用；24h時(shí)，各劑量組對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞的增殖亦表現(xiàn)出輕微促進(jìn)作用。24h時(shí)，烏頭堿各劑量組乳酸分泌量均增加，與溶劑對(duì)照組(DMSO)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，烏頭堿劑量為5×10<'4>ng/ml時(shí)，乳酸分泌量增加率降低。烏頭堿對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydig細(xì)胞)毒性研究采用成熟雄性SD大鼠，通過(guò)Pereoll不連續(xù)密度梯度離心進(jìn)行細(xì)胞純化，采用3 β-羥類固醇脫氫酶染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。用MTT法檢測(cè)

6、濃度為0、5×10<'1>、5×10<'2>、5×10<'3>、5×10<'4>ng/ml的烏頭堿對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞活力的影響，并用丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒檢測(cè)烏頭堿對(duì)間質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的影響以及采用睪酮放免試劑盒檢測(cè)烏頭堿對(duì)間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌功能的影響。結(jié)果顯示：24h和48h時(shí)，烏頭堿各劑量組對(duì)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞活力無(wú)明顯影響，與溶劑對(duì)照組(DMSO)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)：24h時(shí)，烏頭堿各劑量組對(duì)大鼠睪丸間

7、質(zhì)細(xì)胞的MDA含量和SOD活力無(wú)明顯影響，與溶劑對(duì)照組(DMS0)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；4h時(shí)，烏頭堿各劑量組對(duì)hCG誘導(dǎo)大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮分泌無(wú)明顯影響，與溶劑對(duì)照組(DMSO)相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 綜合以上體內(nèi)和體外試驗(yàn)結(jié)果，可以得出如下結(jié)論：在體內(nèi)試驗(yàn)中，烏頭類中藥鹽附子、生川烏、生草烏各劑量組對(duì)雄性大鼠性腺無(wú)明顯毒性作用：體外試驗(yàn)表明，烏頭堿各劑量組(5×10<'1>、5×10<'