生草烏水提液心臟毒性體內(nèi)外試驗(yàn)研究.pdf

1、草烏是烏頭類中藥的一種，為藥典收載的常用中藥。在我國(guó)已有2000多年的使用歷史，功效顯著，療效確切，長(zhǎng)于祛風(fēng)除濕，兼具止痛麻醉、抗炎抑癌之功效。但該類藥物毒性極大，尤其具有很強(qiáng)的心臟毒性，中毒后極易因各型嚴(yán)重心律失常，導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)衰竭，發(fā)生休克，甚至死亡。近年來(lái)，因生草烏誤服及炮制使用不當(dāng)使人中毒死亡的案例在中國(guó)香港及大陸地區(qū)屢見(jiàn)報(bào)道。經(jīng)廣泛查閱國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)烏頭類中藥炮制品的毒性機(jī)制研究較少，體外研究罕見(jiàn)。本課題擬對(duì)經(jīng)高壓蒸煮法得到

2、的生草烏水提液進(jìn)行乳鼠心肌細(xì)胞毒性作用研究及Beagle犬心血管系統(tǒng)的安全藥理研究，從體內(nèi)體外全面評(píng)價(jià)其心臟毒性并探討其作用機(jī)制。 體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)采用原代乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)的方法，設(shè)生草烏水提液10mg生藥/ml，2mg生藥/ml，0.4mg生藥/ml 3個(gè)試驗(yàn)組，烏頭堿10ug/ml陽(yáng)性對(duì)照組，PBS陰性對(duì)照組。在心肌細(xì)胞培養(yǎng)5d，細(xì)胞特征穩(wěn)定后，進(jìn)行染毒，并在染毒24h及48h后觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞特征改變，測(cè)定丙二醛(mal

3、ondialdehyde，MDA)含量，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果顯示：生草烏水提液在染毒劑量達(dá)到10mg生藥/ml時(shí)，對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞毒性損害，出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞搏動(dòng)特征丟失、細(xì)胞活力下降、氧化損傷作用明顯、大量細(xì)胞凋亡；而2mg生藥/ml劑量組僅出現(xiàn)輕微毒性改變，0.4mg生藥/ml劑量組對(duì)心肌細(xì)胞基本無(wú)毒性損害。其毒性機(jī)制可能為：生草烏水提液中含有的烏頭堿及其類似物成分激活了細(xì)胞鈉離子通

4、道，阻斷了L型鈣離子通道活動(dòng)，影響細(xì)胞電生理功能；同時(shí)還通過(guò)抑制心肌細(xì)胞膜的Na<'+>-K<'+>-ATP酶，以及細(xì)胞線粒體上的各種呼吸酶，引起心肌細(xì)胞能量代謝障礙，直接造成細(xì)胞氧化損傷。而心肌細(xì)胞“鈣超載”和有氧代謝障礙又進(jìn)一步誘發(fā)細(xì)胞凋亡，加重細(xì)胞毒作用。 體內(nèi)試驗(yàn)采用Beagle犬進(jìn)行心血管系統(tǒng)的安全藥理研究，試驗(yàn)設(shè)單個(gè)最大給藥劑量組，Beagle犬在麻醉狀態(tài)下經(jīng)口插入胃管給予生草烏水提液2.49g生藥/kg，分別于給藥

5、前及給藥后30，60，90，120，180，240min測(cè)定動(dòng)物的收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、心電圖標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)(心率、P、T、R波和QRS、PR、QT間期)。結(jié)果顯示：生草烏水提液給藥后，各時(shí)間點(diǎn)Beagle犬的血壓(收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓)、心率，P、T、R波和QRS、PR、Q-T間期等指標(biāo)與給藥前相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。綜合以上體內(nèi)和體外試驗(yàn)結(jié)果，可以得出以下結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)室條件下，生草烏水提液10mg生藥/ml