氯化鋰聯(lián)合自體激活雪旺細(xì)胞治療脊髓損傷的研究.pdf

1、【目的】：將Wistar成鼠自體激活雪旺細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并聯(lián)合氯化鋰對急性脊髓損傷動物模型進(jìn)行治療，對脊髓損傷恢復(fù)情況進(jìn)行行為學(xué)、神經(jīng)電生理學(xué)和組織學(xué)評價，探討氯化鋰聯(lián)合移植自體激活雪旺細(xì)胞在治療脊髓損傷中的作用，評價該方法的療效。 【方法】：通過結(jié)扎雙側(cè)隱神經(jīng)激活自體雪旺細(xì)胞并進(jìn)行體外分離、培養(yǎng)、純化，測定不同培養(yǎng)時期培養(yǎng)基中NGF、BDNF含量變化。Wistar大鼠48只以改良Allens’法建立T<,10>急性脊髓損傷模

2、型。隨機分為4組，每組12只：單純DMEM移植空白對照組、氯化鋰腹腔注射組、自體激活雪旺細(xì)胞(autologus activatedschwann cells，AASCs)移植組和氯化鋰聯(lián)合AASCs組。術(shù)后每周每組隨機選取5只大鼠采用NICOLET Viking IVB型肌電圖儀進(jìn)行體感誘發(fā)電位(Somatosensoryeyoked potential，SEP)和運動誘發(fā)電位(Motion eyoked potential， MEP

3、)檢查，與正常鼠比較。術(shù)后每周每組隨機選取8只對實驗動物進(jìn)行功能評價(BBB行為功能評分)。12周后每組隨機選擇2只動物進(jìn)行10％BDA神經(jīng)順行示蹤標(biāo)記，標(biāo)記2周后(術(shù)后14周)處死動物。取出動物損傷段脊髓作5μm快速冰凍切片后，進(jìn)行Cy3熒光染色、熒光免疫組化及HE染色，切片染色用顯微圖像分析軟件Image pro plus分析處理。比較各組的統(tǒng)計學(xué)差異。 【結(jié)果】：自體激活雪旺細(xì)胞經(jīng)分離純化后在體外穩(wěn)定傳4代，生長狀態(tài)良好。

4、術(shù)后4周BBB行為功能評分實驗組較對照組功能恢復(fù)明顯，各組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(ANOVA檢驗，P<0.05)。術(shù)后起體感誘發(fā)電位檢查，聯(lián)合移植組和自體激活雪旺細(xì)胞移植組以及單純氯化鋰組組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；BDA順行示蹤，HE染色、熒光免疫組化染色顯示聯(lián)合移植組和雪旺細(xì)胞移植組較單純氯化鋰組有較多的神經(jīng)纖維穿過缺損部位，而空白對照組幾乎未見再生神經(jīng)纖維穿越，各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。 【結(jié)論】：自