甲減大鼠腎臟脂質(zhì)過氧化及GPx、SOD基因水平的實驗研究.pdf

1、目的： 1 觀察甲減Wistar大鼠腎臟代表抗氧化能力的酶谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)的組織學(xué)水平，以及過氧化損傷致組織中丙二醛(MDA)及組織細胞膜Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase水平的變化。 2 觀察甲減大鼠腎臟GPx、SOD-mRNA的基因表達水平。 方法： 本研究在成功復(fù)制甲減動物模型的基礎(chǔ)上，利用組織學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)RT-PC

2、R方法，系統(tǒng)研究甲減大鼠腎臟過氧化損傷機制。本研究分五部分： 1 甲減動物模型的復(fù)制：選用健康斷乳一個月，體重在120-140g的Wistar大鼠，雌雄各半，隨機分為甲減組(ItYPO)和甲功正常組既對照組(EU)，每組10只。HYPO組動物飼以低碘地區(qū)的糧食(玉米、小麥、黃豆)制成的低碘飼料并添加動物必需的無機鹽和維生素，平均碘含量小于50μg/kg，EU組飼以正常鼠料，上述飼料中各種糧食的配比是相同的，以保證飼料的主要營養(yǎng)素

3、相同，只是碘含量不同；HYPO組飲用去離子水(水中碘含量為0μg/L)， EU組飲用自來水，飼養(yǎng)24周。 2 甲狀腺組織形態(tài)學(xué)：常規(guī)HE染色，觀察甲狀腺形態(tài)學(xué)變化。 3 血清學(xué)測定：分別留取兩組動物的不抗凝全血4ml，離心，吸取血清約2ml，利用競爭結(jié)合放射免疫分析方法測定血清TT<,3>、TT<,4>、FT<,3>、FT<,4>的水平。 4 腎臟組織勻漿過氧化損傷相關(guān)酶學(xué)測定：上述大鼠飼養(yǎng)24周，取腎臟組織勻

4、漿，利用生物化學(xué)的方法分別測定組織中GPx、SOD、Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase的活性及MDA的表達水平。 5 腎臟組織過氧化損傷相關(guān)酶的基因表達：取-80℃保存的新鮮腎臟組織，利用Trizol一步法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)成cDNA，應(yīng)用RT-PCR的方法分別擴增目的基因GPx、SOD，利用管家基因β-actin作為內(nèi)參照，1％瓊脂糖凝膠電泳后應(yīng)用MIAS-5.0進行灰度測量，結(jié)果取目的基因與

5、內(nèi)參照的比值進行半定量分析。 結(jié)果： 1 對大鼠甲狀腺組織形態(tài)學(xué)觀查顯示，甲減組甲狀腺呈彌漫增生性甲腫改變，甲狀腺濾泡增生，體積較小，濾泡腔變小，形狀不規(guī)則，腔內(nèi)膠質(zhì)顯著減少或缺如，濾泡上皮細胞增生肥大，呈復(fù)層高柱狀，胞漿淡染，呈透明狀，部分區(qū)域可見上皮細胞空泡變性，細胞項緣邊界不完整，甚至細胞結(jié)構(gòu)消失，濾泡壁破壞。 2 甲減組TT<,3>、TT<,4>、FT<,3>、FT<,4>均明顯下降(P<0.01)。提示

6、同一種動物通過食用含碘量很低的飼料及飲用水，可致甲狀腺功能減退，故低碘飲食使甲減動物模型復(fù)制成功。 3 與甲功正常組相比，甲減組動物腎臟組織中GPx活性顯著升高(P<0.05)，SOD活性顯著下降(P<0.05)；膜標志酶Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase活性明顯下降(P<0.05)，MDA含量顯著增加(P<0.05)。結(jié)果表明甲狀腺功能減退癥動物腎臟中，盡管GPx升高可以抵消過多的自由基，但S

7、OD的下降超過GPx代償性的升高作用，導(dǎo)致過氧化產(chǎn)物MDA升高，同時膜標志酶Na<'+>，K<'+>-ATPase、Ca<'2+>-ATPase功能的下降，造成腎臟組織的過氧化損傷。 4 與甲功正常組相比，甲減組動物腎臟組織中GPx的基因表達水平略高，但無統(tǒng)計學(xué)意義，SOD表達水平明顯下降(P<0.05)。上述與組織水平上相似的結(jié)果進一步在分子水平上證實了甲減組動物腎臟存在過氧化損傷。 結(jié)論： 1 碘不足導(dǎo)致