兔肺動(dòng)脈栓塞-再灌注肺損傷中核因子-κB對(duì)一氧化氮的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：肺栓塞(PE)溶栓治療后可出現(xiàn)再灌注損傷，其發(fā)生機(jī)制目前尚未完全闡明。一氧化氮(NO)是近年來研究較多的一個(gè)具有自由基性質(zhì)的生物信息分子和效應(yīng)分子；一氧化氮合酶(NOS)是生成NO的關(guān)鍵、唯一的限速酶。核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-kB是一種具有多向性調(diào)節(jié)作用的快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，能與多種基因啟動(dòng)子部位的kB位點(diǎn)特異性結(jié)合并促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。近年來研究發(fā)現(xiàn)NF-kB調(diào)節(jié)NO生成，并在肺E/R中起重要作用，但具體機(jī)制仍不十分明確。本研究制作了新西蘭兔模型

2、研究NF-kB對(duì)兔肺栓塞/再灌注(embolism/reperfusion，E/R)損傷中NO、NOS變化的影響，并對(duì)肺E/R損傷的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行探討。 方法：本實(shí)驗(yàn)以新西蘭大耳白兔，應(yīng)用Berman球囊導(dǎo)管首先堵塞新西蘭白兔左下肺動(dòng)脈，然后球囊放氣恢復(fù)肺組織血流供應(yīng)，建立急性兔肺E/R損傷模型。觀察肺組織形態(tài)學(xué)變化、肺組織勻漿及(或)肺泡灌洗液(BALF)中NO、NOS、丙二醛(MDA)、過氧化物歧化酶(SOD)的動(dòng)態(tài)變化；采用

3、免疫組織化學(xué)方法研究在肺E/R過程中NF-kBp65肺組織中的分布。 結(jié)果：(1)光鏡下HE染色顯示E/R后肺呈彌漫性病變，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，肺泡壁充血、水腫，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡內(nèi)有大量滲出物、紅細(xì)胞等成分，部分肺組織實(shí)變。(2)MDA的變化：與對(duì)照組相比，肺組織均漿中MDA在肺栓塞2h時(shí)增高，再灌注1h后繼續(xù)增高，并于再灌注2h達(dá)到高峰(0.68±0.05，0.72±0.09，0.84±0.07)。再灌注2h組MDA高于再灌注1

4、h組(P<0.05)，并且明顯高于肺栓塞2h組(P<0.05)。BALF中MDA的變化趨勢(shì)與肺組織均漿中MDA的動(dòng)態(tài)改變相同。(3)SOD的變化：與對(duì)照組相比，肺組織均漿中SOD在肺栓塞2h時(shí)開始降低，再灌注1h后繼續(xù)降低，并于再灌注2h最為明顯(418.66±78.93，326.63±59.01，253.81±35.12，P<0.05)；并且再灌注2h時(shí)明顯低于栓塞2h(P<0.05)。BALF中SOD的變化趨勢(shì)亦與肺組織均漿中SOD

5、的動(dòng)態(tài)改變相同。(4)NO的變化：與對(duì)照組相比，肺組織均漿中NO在肺栓塞2h時(shí)增高，再灌注1h后繼續(xù)增高，并于再灌注2h達(dá)到高峰(2.24±0.38，2.83±0.63，4.26±0.83)。再灌注2h組NO高于再灌注1h組(P<0.05)，并且明顯高于肺栓塞2h組(P<0.05)。BALF中NO的變化趨勢(shì)與肺組織均漿中NO的動(dòng)態(tài)改變基本相同。(5)NOS的變化：與對(duì)照組相比，肺組織均漿中iNOS在肺栓塞2h時(shí)增高，再灌注1h后繼續(xù)增高

6、，并于再灌注2h達(dá)到高峰(56.70±8.04，70.35±6.36，100.65±12.15)。再灌注2h組iNOS高于再灌注1h組(P<0.05)，并且明顯高于肺栓塞2h組(P<0.05)；兔肺E/R各組(2E、2E/1R、2E/2R)肺組織cNOS(588.52±79.09，539.50±73.81，537.99±64.33，P>0.05)，與對(duì)照組、假手術(shù)組無顯著性差異，對(duì)照組與假手術(shù)組之間亦無顯著性差異(566.18±65.1

7、2，563.20±85.93，P>0.05)。(6)隨著肺E/R 發(fā)生，免疫組織化學(xué)染色顯示兔肺組織中NF-kBp65陽(yáng)性細(xì)胞主要在肺泡上皮細(xì)胞、部分小血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎細(xì)胞(單核細(xì)胞、粒細(xì)胞)內(nèi)大量表達(dá)。與假手術(shù)組相比，肺栓塞2h、再灌注1h、2h時(shí)，兔肺組織NF-kBp65的陽(yáng)性面積均顯著增高(P<0.05)。(7)相關(guān)性分析表明，NF-kBp65表達(dá)水平與肺組織中iNOS及NO的含量、BALF中NO含量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；

8、NF-kBp65陽(yáng)性表達(dá)越高而灰度值越低。肺組織勻漿中iNOS表達(dá)水平與肺組織勻漿及BALF中NO含量呈顯著正相關(guān)(P<0.01)；而cNOS表達(dá)水平與肺組織勻漿及BALF中NO含量均無相關(guān)關(guān)系(P>0.05)。肺組織勻漿及BALF中NO表達(dá)水平分別與肺組織勻漿及BALF中MDA含量呈顯著正相關(guān)(P<0.01)；與肺組織勻漿及BALF中SOD的含量呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.01)。 結(jié)論：(1)本實(shí)驗(yàn)以新西蘭大耳白兔，應(yīng)用5F Be