矮牽牛花香相關(guān)的ERF篩選及其調(diào)節(jié)機(jī)理初探.pdf

1、矮牽牛是一種模式植物，能被用來研究乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和花香合成途徑。乙烯響應(yīng)因子ERF在乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的最下游，含有AP2/ERF結(jié)構(gòu)域，在果實(shí)成熟、花衰老、植物生長發(fā)育、逆境響應(yīng)和激素調(diào)節(jié)等方面有重要的作用。前人的研究發(fā)現(xiàn)矮牽牛授粉后香氣會急劇減少，而此時(shí)乙烯卻急劇增加，表明矮牽?；ㄏ闶芤蚁┱{(diào)節(jié)。ERF作為乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的組分，為了解矮牽牛ERF在調(diào)節(jié)花香合成中的作用機(jī)理，本研究在獲得第Ⅷ族的ERF轉(zhuǎn)錄因子的基礎(chǔ)上，分析了ERF轉(zhuǎn)錄因子

2、對花香基因的調(diào)控關(guān)系，PhERF6的表達(dá)特性，VIGS沉默PhERF6和PhERF30后，花香轉(zhuǎn)錄因子和花香合成酶基因的表達(dá)，以及PhERF30的亞細(xì)胞定位情況，以期了解PhERF與花香合成的關(guān)系。研究結(jié)果如下：
　　1.利用雙熒光素酶檢測體系，分析了PhERF6、PhERF25和PhERF30轉(zhuǎn)錄因子對花香基因ODO1、EOBI、EOBII、PAAE、BPBT、PAL表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：PhERF6的超表達(dá)顯著降低ODO1、B

3、PBT和PAL的表達(dá)。另外，沉默PhERF30后，ODO1、EOBII和EOB1的表達(dá)顯著上升，同樣，沉默PhERF25后，EOBI的表達(dá)也顯著上升。表明PhERF6、PhERF25和PhERF30都能抑制花香基因的表達(dá)來影響花香的生物合成。
　　2.利用酵母雜交系統(tǒng)研究蛋白之間的相互作用，篩選并獲得了與矮牽牛 PhERF6轉(zhuǎn)錄因子互作的蛋白。PhERF6全長能與ODO1和EOBI的全長互作，EOBI互作的核心域位于N端，說明Ph

4、ERF6可能通過與花香轉(zhuǎn)錄因子的互作來調(diào)控花香的合成。
　　3.實(shí)時(shí)熒光定量分析表明，PhERF6的表達(dá)呈現(xiàn)出晝夜節(jié)律性的表現(xiàn)，和矮牽牛花香釋放的規(guī)律是協(xié)調(diào)的，表明PhERF6在矮牽?；ㄏ汜尫诺倪^程中呈現(xiàn)不同的表達(dá)特征，參與矮牽?；ㄏ愕纳锖铣?。利用 VIGS沉默體系，減少花瓣中 PhERF6和PhERF30的表達(dá)量，花香轉(zhuǎn)錄因子以及花香合成酶基因的表達(dá)量均上升,說明了PhERF6和PhERF30對花香轉(zhuǎn)錄因子和花香合成酶基因的表