矮牽牛重瓣花發(fā)育相關(guān)基因的分離和表達(dá)研究.pdf

1、在觀賞植物中，重瓣性是很重要的一類觀賞性狀，研究此性狀分子形成機(jī)理對提高植物的觀賞性有很大意義。矮牽牛是近些年研究花發(fā)育的模式植物，因其具有自然的重瓣品種，對于研究重瓣性狀是一種比較理想的實(shí)驗材料。關(guān)于重瓣花形成機(jī)制的論述大多在于C類基因的突變而引起的雄蕊瓣化和花分生組織的終止程序推遲方面。重瓣矮牽牛是矮牽牛的一種自然突變體，具有很高的觀賞價值，因此，研究它的花形態(tài)建成的相關(guān)調(diào)控機(jī)制絡(luò)，即有利于商業(yè)重瓣品種的培育，還可以為雄性不育系的構(gòu)

2、建提供指導(dǎo)，并且能進(jìn)一步地豐富花發(fā)育的相關(guān)理論。CRISPR-Cas系統(tǒng)作為一種新興的基因定點(diǎn)編輯技術(shù)逐漸成熟并在多個植物中成功得到應(yīng)用，利用此技術(shù)能夠?qū)δ康幕蜻M(jìn)行靶向的敲除或敲入。該技術(shù)的應(yīng)用對研究重瓣花形成具體作用機(jī)制有很大意義。
　　為研究重瓣花形成的相關(guān)作用機(jī)制，本試驗以矮牽牛為研究材料，根據(jù)花發(fā)育ABCDE模型的理論基礎(chǔ)，選取A類基因中的PhAP2A，PhWUS基因，C類基因PMADS3、FBP6，生長素類PhARF3

3、基因進(jìn)行差異表達(dá)分析。分離了矮牽牛的PMADS3、FBP6兩個基因，利用CRISPR-Cas9植物基因編輯系統(tǒng)構(gòu)建敲除單瓣矮牽牛PMADS3、FBP6基因的載體對矮牽?；蚪M進(jìn)行編輯。主要研究結(jié)果如下：
　　通過 RT-PCR得到 PhAP2A，PhWUS，PMADS3，PhARF3幾個基因的差異表達(dá)結(jié)果；克隆分離出PMADS3、FBP6兩基因的部分基因組序列；成功構(gòu)建敲除單瓣矮牽牛PMADS3、FBP6基因的載體，并通過農(nóng)桿菌介