抗甲狀腺藥物介導(dǎo)Graves病患者粒細(xì)胞缺乏高表達(dá)基因的篩選與克隆.pdf

1、目的：篩選、克隆Graves病（GD）服用抗甲狀腺藥物（ATD）介導(dǎo)粒細(xì)胞缺乏患者與粒細(xì)胞正?；颊咧g差異表達(dá)的、可能對(duì)抗甲狀腺藥物致Graves病患者粒細(xì)胞缺乏起促進(jìn)作用的相關(guān)基因。 方法：（1）采用淋巴細(xì)胞分離液分離GD服用ATD導(dǎo)致粒細(xì)胞缺乏患者與粒細(xì)胞正?；颊叩膯蝹€(gè)核細(xì)胞，加入EB病毒進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，應(yīng)用抑制性消減雜交（SSH）的方法構(gòu)建GD服用ATD導(dǎo)致粒細(xì)胞缺乏患者與粒細(xì)胞正?；颊咧g差異表達(dá)的cDNA消減文庫（2）克

2、隆，鑒定ATD介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏特異性高表達(dá)的基因片段，以生物信息學(xué)方法進(jìn)行初步分析（3）設(shè)計(jì)基因特異性引物，用5’端和3’端cDNA末端快速擴(kuò)增法（RACE）進(jìn)行全長(zhǎng)基因序列擴(kuò)增。 結(jié)果：成功構(gòu)建了具有高消減效率的ATD介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏cDNA消減文庫，對(duì)其中陽性克隆的插入cDNA片段進(jìn)行測(cè)序，共獲得34個(gè)不同的EST，經(jīng)Blastn程序檢索Genbank表明，其中有21個(gè)EST為未知新序列，提示它們可能來自于ATD

3、介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏患者特異性高表達(dá)的新基因。這21個(gè)可能代表新基因的EST正準(zhǔn)備登陸NCBI的Genbank數(shù)據(jù)庫，為從分子生物學(xué)水平探討ATD介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制提供了新的突破口。正通過RACE的方法獲得這些新EST序列的全長(zhǎng)cDNA。 結(jié)論： 1、成功構(gòu)建了人 ATD介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏的cDNA消減文庫； 2、初步篩選到34條EST，其中21條新EST,它們可能代表著在ATD介導(dǎo)GD患者粒細(xì)胞缺乏中