擴張型心肌病心肌細(xì)胞外基質(zhì)的重塑及其調(diào)控機制.pdf

1、目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)及金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1，TIMP-1)在阿霉素擴張型心肌病(dilated cardiomyopathy diease，DCM)心肌間質(zhì)重塑中的作用和意義，觀察血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin-coverting enzyme inhibit

2、or，ACEI)干預(yù)治療對MMP-2和TIMP-1在心室組織中表達(dá)的影響，以及血漿I型前膠原羧基端肽(procollagen typeⅠ carboxylpropetide，PICP)、Ⅲ型前膠原氨基端肽(procollagentypeⅢ N-terminalpropetide，PIIINP)濃度變化及其與心肌纖維化程度的相關(guān)性。 方法：雄性SD大鼠分2組(1)正常對照組10只；(2)DCM組50只：阿霉素2mg/Kg腹腔注射，

3、每周1次，連續(xù)8周后行心臟超聲心動圖，將達(dá)到DCM標(biāo)準(zhǔn)的大鼠再分為3組：①A組(卡托普利高劑量干預(yù)組)，50mg/Kg·d灌胃給藥，連續(xù)3周；②B組(卡托普利低劑量干預(yù)組)，25mg/Kg-d灌胃給藥，連續(xù)3周；③C組(DCM對照組)。取各組心臟組織切片行HE染色觀察心肌的病理變化，苦味酸天狼星紅染色(Van Gieson，VG染色)進(jìn)行心室膠原特異染色及定量分析，免疫組化染色法對各組大鼠心臟心室組織MMP-2、TIMP-1蛋白的表達(dá)進(jìn)

4、行半定量檢測。采用RT-PCR技術(shù)檢測心室心肌MMP-2及TIMP-1mRNA的表達(dá)。ELISA方法對血漿PICP和PIIINP的濃度進(jìn)行定量測定。 結(jié)果： 1、大鼠生存情況：對照組全部存活；腹腔注射阿霉素的50只大鼠，死亡4只。 2、超聲心動圖檢測：與正常對照組相比，給予阿霉素腹腔注射的DCM組，心腔明顯擴張，左室舒張期末內(nèi)徑(left ventricular enddiastole，LVED)、左室收縮期末內(nèi)

5、徑(left ventricular endsystole，LVDS)明顯的增加(P<0.05)；左室內(nèi)徑縮短率(fraction-shortening，F(xiàn)S)、左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，EF)明顯降低(P<0.05)。 3、心肌組織病理學(xué)檢查：①HE染色見正常對照組心肌細(xì)胞排列均勻整齊，橫紋清楚，細(xì)胞大小均一，心肌細(xì)胞間隙無變化；DCM各組心臟組織有不同程度的炎性病變，

6、心肌細(xì)胞排列紊亂呈多灶性溶解，心肌細(xì)胞變性、壞死，相鄰細(xì)胞間隙增大，排列紊亂、核大深染、異型。DCM組心肌組織形態(tài)學(xué)的改變符合擴張型心肌病的病理學(xué)改變。②VG染色：DCM組較正常對照組的膠原纖維明顯增加。DCM組膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction，CVF)高于正常對照組(P＜0.05)，而A組和B組的CVF值較C組明顯減少(P＜0.05)。 4、免疫組化染色：結(jié)果示MMP-2、TIMP-1蛋白主要表達(dá)

7、于心肌細(xì)胞的胞質(zhì)及心肌細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)中。MMP-2在正常對照組、A組和B組微弱表達(dá)，而在C組表達(dá)增強。C組MMP-2的表達(dá)高于正常對照組(P＜0.01)；而A組MMP-2的表達(dá)顯著低于C組(P＜0.01)，B組MMP-2的表達(dá)低于C組(P＜0.05)。TIMP-1在正常對照組、A組和B組呈較強的表達(dá)，而在C組表達(dá)較弱。C組TIMP-1的表達(dá)低于正常對照組(P＜0.01)；而A組TIMP-1

8、的表達(dá)明顯高于C組(P＜0.01)，B組TIMP-1的表達(dá)高于C組(P＜0.05)。 5、心室心肌MMP-2、TIMP-1的mRNA表達(dá)：MMP-2 mRNA表達(dá)C組心室心肌中較正常對照組顯著增加(P＜0.01)，A組較C組有明顯的降低(P＜0.01)，B組低于C組(P＜0.05)。TIMP-1mRNA的表達(dá)C組較正常對照組有明顯的減低(P＜0。05)，A組較C組有明顯的增加(P＜0.05)，B組與C組無明顯差異(P＞0.05)

9、。 6、血漿中PICP、PIIINP的濃度：C組血漿的PICP、PIIINP的濃度高于正常對照組(P＜0.01)；A、B組血漿中PICP、PIIINP的濃度顯著低于C組(P＜0.01)； 結(jié)論：MMP和TIMP參與了DCM發(fā)生發(fā)展過程中心肌細(xì)胞外基質(zhì)的重塑，MMP-2/TIMP-1比率增高可促進(jìn)DCM心肌細(xì)胞外基質(zhì)膠原增生，從而影響心肌纖維化程度。血漿中PICP、PIIINP的濃度與心肌纖維化程度相關(guān)。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑