烏司他丁聯(lián)合Ghrelin對內(nèi)毒素血癥大鼠腸功能障礙的影響.pdf

1、背景及目的:
　　膿毒癥是多因素共同作用導致的獲得性疾病,可由先天應激,細胞損傷以及器官功能障礙等因素引起,系感染、燒傷、嚴重創(chuàng)傷、外科大手術(shù)、病理產(chǎn)科、中毒及心肺復蘇術(shù)后常見的并發(fā)癥,是ICU的首要致死原因,其病死率仍高達30％-70%,其發(fā)生率仍以每年1.5%-8%的速度上升。膿毒癥時最常累及腸道,當腸道損傷時,其通透性增加、腸屏障功能受損,腸道細菌及其毒素得以吸收進入循環(huán)系統(tǒng)而發(fā)生細菌移位,使全身炎癥反應綜合癥(SIRS)加

2、劇、失控,嚴重時誘發(fā)多器官功能障礙綜合征(MODS),甚至危及患者生命。已經(jīng)有眾多研究表明腸道功能降低與腸道屏障關(guān)系密切。腸道屏障由機械屏障、化學屏障、免疫屏障與生物屏障共同構(gòu)成,其中機械屏障和免疫屏障的功能是判斷腸道屏障功能的常見指標,機械屏障是指完整的彼此緊密連接的腸粘膜上皮結(jié)構(gòu)。腸粘膜防御素-5(RD-5)和腸三葉因子家族-3(TFF-3)蛋白是常用的判斷腸免疫屏障功能的指標蛋白。而眾所周知,TNF-α、IL-6和 HMGB1是膿

3、毒癥發(fā)生、發(fā)展中最重要的促炎因子,嚴重影響膿毒癥中腸道功能的恢復,甚至造成全身多器官的損害。以上活性因子可以促進炎癥反應,改變血管緊張度以及通過特定G蛋白受體增加血管通透性。另外這些細胞因子間形成了聯(lián)系緊密的互動關(guān)系,可以形成“炎癥瀑布效應”。近期有多項研究表明TNF-α、IL-6、HMGB1與膿毒癥的嚴重程度及預后關(guān)系密切。因此觀察 TNF-α、IL-6、HMGB1等指標對于膿毒癥的預防和治療具有重要意義。
　　烏司他丁(Uli

4、nastatin)系健康成年男性尿液中分離、純化出來的一種糖蛋白,其可對多種蛋白水解酶的活性有抑制作用,是一種廣譜的蛋白酶抑制劑(Ulinary trypsin inhibitor,UTI),另具有抑制溶酶體酶的釋放、抑制心肌抑制因子產(chǎn)生、穩(wěn)定溶酶體膜,清除氧自由基及抑制炎癥介質(zhì)釋放的作用。
　　Ghrelin是生長激素促分泌素受體(GSHR)的內(nèi)源性配體,大部分Ghrelin由胃底部X/ A樣細胞分泌,另外一部分Ghrelin來

5、源于小腸。它能夠與體內(nèi)的GHSR結(jié)合,劑量依賴性的促進生長激素釋放,進而通過GH/IGF-1軸介導其生物活性。眾多的研究表明,Ghrelin能夠明顯促進胃腸蠕動,加快胃腸排空。對于膿毒癥引起的麻痹性腸梗阻, Ghrelin也有很好的療效。同時,Ghrelin能夠明顯改善缺血再灌注大鼠胃腸道的潰瘍形成、組織充血及毛細血管通透性改變,降低血TNF-α濃度。
　　雖然已有研究表明UTI、GHL在膿毒癥時對臟器功能障礙均有改善作用,但針對

6、膿毒癥腸功能障礙的特異相關(guān)性研究較少,且作用相應機制也不甚明了。鑒于膿毒癥發(fā)生發(fā)展過程中腸道功能的重要作用,本實驗擬以內(nèi)毒素血癥大鼠為膿毒癥模型,觀察了UTI、GHL對其小腸屏障功能、運動功能及全身和腸道局部炎癥反應的影響,以期為膿毒癥時腸功能障礙的治療提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法:
　　將所有大鼠采用隨機數(shù)字法隨機分為5組(n=12),對照組(CON組)、內(nèi)毒素組(LPS組)、烏司他丁組(UTI組)、Ghrelin組(G

7、HL組,)、UTI+Ghrelin組(UTI+GHL組)。大鼠以3%的戊巴比妥鈉(35mg/kg)腹腔麻醉。各實驗組麻醉后,以內(nèi)毒素(Lipopolysaccharide,LPS,15mg/kg)腹腔注射構(gòu)建內(nèi)毒素血癥模型,CON組以等量生理鹽水代替內(nèi)毒素腹腔注射。在LPS注射后10min,UTI組以UTI15萬U/kg腹腔注射, GHL組給予Ghrelin25μg/kg腹腔注射,UTI+GHL組給予UTI15萬U/kg+Ghrelin

8、25μg/kg腹腔注射,CON、LPS組給予同等劑量生理鹽水。各組12h后再次給藥。每個實驗組于術(shù)后12h和24h分別處死6只大鼠,采用HE染色、RealTime-PCR、小腸葡聚糖藍-2000(BD-2000)推進率和ELISA等方法觀察各組大鼠小腸屏障功能、小腸運動功能以及炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6、HMGB1等變化。
　　結(jié)果:
　　HE染色結(jié)果顯示UTI+GHL組、UTI組與LPS相比能不同程度減輕回腸結(jié)構(gòu)損傷,且

9、UTI+GHL組更明顯(P<0.05)。UTI組和UTI+GHL組在RD-5和TFF3 mRNA表達水平方面較LPS組有顯著提高(P<0.05),且UTI+GHL組升高明顯(P<0.05)。GHL組和UTI+GHL組較LPS組小腸運動功能均顯著升高,且UTI+GHL組更為明顯(P<0.05)。UTI+GHL組、UTI組、GHL組與LPS相比均能顯著降低TNF-α、IL-6、HMGB1等炎癥因子表達(P<0.05),且在腸粘膜組織中發(fā)現(xiàn)了

10、類似結(jié)果。
　　結(jié)論:
　　本實驗首先通過觀察膿毒癥時小腸粘膜微結(jié)構(gòu)損傷程度以及RD-5和TFF3mRNA表達水平變化,證實 UTI和Ghrelin聯(lián)用能明顯改善腸道內(nèi)皮細胞免疫功能,保護腸黏膜屏障,有效緩解膿毒癥癥狀,減緩膿毒癥病情的發(fā)展。其次UTI聯(lián)合Ghrelin能夠有效降低膿毒癥大鼠全身及腸粘膜炎性因子的過度激活與釋放使得腸道功能得到改善。腸屏障結(jié)構(gòu)和功能的損害,必然導致腸運動功能的減弱。因而,雖然本實驗未觀察到膿毒