哺乳運(yùn)動朊蛋白與疊朊的原核表達(dá)及牛朊蛋白單抗制備.pdf

1、本文以基因克隆、表達(dá)和淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)為基礎(chǔ),制備并鑒定了針對秦川黃牛成熟朊蛋白mPrP的單抗,以期用于瘋牛病的免疫診斷研究. 在秦川黃牛、甘肅土種綿羊和漢族人朊蛋白PrP和疊朊Dpl編碼基因0RF的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步構(gòu)建出含成熟蛋白編碼基因的重組表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)了3個mPrP和13個mDpl的E.coli中的高效表達(dá).以SAF-70單抗為檢測抗體的Western Blot分析表明3個重組mPrP不僅具有強(qiáng)的反應(yīng)原性而且能夠在

2、細(xì)胞內(nèi)形成二聚體.蛋白酶K消化結(jié)果農(nóng)明重組mPrP不具有朊病毒PrP<'Sc>的蛋白酶K抗性. 以純化復(fù)性的黃牛mPrP免疫Balb/C鼠,加強(qiáng)免疫3天后取脾細(xì)胞與SP2/0細(xì)胞融合,間接ELISA法篩選陽性細(xì)胞株,并進(jìn)一步鑒定和層析法純化的腹水抗體.結(jié)果表明獲得了7個能穩(wěn)定分泌抗黃牛mPrP的細(xì)胞株,除N17抗體屬于IgG2b外,其余均屬于IgG2a.7個單抗腹水效價介于1×10<'4>-1×10<'4>之間,親和常數(shù)介于10