牛成熟疊朊蛋白基因的克隆表達(dá)及抗血清的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以牛血液的總DNA為模板，PCR擴(kuò)增牛疊朊編碼基因(PRND)的ORF，克隆至pMD18T載體構(gòu)建重組質(zhì)粒BoPRND-T。再以BoPRND-T質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增出編碼牛成熟疊朊(bomDpl)的基因片段，與表達(dá)載體pET30a(+)連接，構(gòu)建出含有牛成熟疊朊的編碼基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pET-bomDpl。酶切鑒定和測(cè)序后，轉(zhuǎn)化pET-bomDpl至宿主菌E.coli BL21(DE3)中，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。鎳柱親和層析后，再用電洗脫

2、法純化融合蛋白。SDS-PAGE結(jié)果顯示表達(dá)產(chǎn)物分子量約為15KDa，純化獲得的融合蛋白純度達(dá)到90％以上。 以純化的融合蛋白作為免疫原，以含有pET30a(+)空載體的E coli BL21(DE3)菌體蛋白作為對(duì)照免疫原，分別與弗氏完全佐劑1：1混合乳化，按500μg/只背部皮下注射成年青紫蘭兔，在第3周、第5周和第7周用弗氏不完全佐劑替代弗氏完全佐劑進(jìn)行加強(qiáng)免疫，第4次免疫10天后心臟取血，用間接ELISA法和wester

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