腎綜合征出血熱患者血漿可溶性CD163與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性研究.pdf

1、腎綜合征出血熱（hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS）是由漢坦病毒（hantavirus）感染引起的一種自然疫源性疾病，主要臨床表現(xiàn)為短期發(fā)熱、出血、低血壓休克和腎臟損傷，典型病例具有發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期五期臨床經(jīng)過(guò)。近半個(gè)世紀(jì)來(lái)全世界每年HFRS發(fā)病人數(shù)約10萬(wàn)，其中70％～90%的病例發(fā)生在中國(guó)，病死率約為1%～10%。HFRS的基本病理變化是全身小血管及毛細(xì)血

2、管內(nèi)皮炎癥、功能障礙、免疫細(xì)胞浸潤(rùn)、通透性增加。然而，HFRS的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。目前的觀點(diǎn)認(rèn)為，漢坦病毒引起的 HFRS是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜的病理過(guò)程，主要是病毒直接作用損傷和繼發(fā)性免疫損傷共同所致的結(jié)果。病毒感染引起機(jī)體的免疫損傷包括免疫復(fù)合物沉積、補(bǔ)體激活、T細(xì)胞的細(xì)胞免疫應(yīng)答和B細(xì)胞的體液免疫應(yīng)答、血小板功能障礙以及漢坦病毒感染誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子等。
　　單核/巨噬細(xì)胞是機(jī)體抗病毒免疫的重要組成部分，在病毒

3、感染后它可觸發(fā)機(jī)體的免疫/炎癥反應(yīng)參與啟動(dòng)和直接的抗病毒效應(yīng)，是機(jī)體固有免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁。在外周血中單核細(xì)胞是一群異質(zhì)性細(xì)胞，根據(jù)單核細(xì)胞表面CD14及CD16的表達(dá)情況可分為3個(gè)亞群，經(jīng)典單核細(xì)胞(CD14++CD16?，Mon1)、中間單核細(xì)胞(CD14++CD16+，Mon2)和非經(jīng)典單核細(xì)胞(CD14+CD16++，Mon3)。Mon1占外周血單核細(xì)胞的80%～90%，Mon2和Mon3共占外周血單核細(xì)胞的10%～20%。

4、在炎癥刺激及自身分化的作用下外周血單核細(xì)胞各亞群的構(gòu)成比例和功能處于動(dòng)態(tài)變化中。
　　CD163是血紅蛋白/珠蛋白清道夫受體，特異性地存在于單核/巨噬細(xì)胞表面。它最主要也是研究最多的功能是可特異性識(shí)別血紅蛋白-珠蛋白復(fù)合體并與之結(jié)合后內(nèi)吞，使血紅蛋白轉(zhuǎn)化為膽紅素、亞鐵離子及一氧化碳，進(jìn)而避免了血紅蛋白對(duì)機(jī)體的氧化損傷。CD163還能從單核細(xì)胞表面脫落至血循環(huán)中，成為可溶性 CD163（sCD163），發(fā)揮抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。

5、>　　sCD163已在多種感染及炎癥性疾病的相關(guān)研究中進(jìn)行了測(cè)定和報(bào)道，例如，敗血癥、糖尿病、肺結(jié)核、肝臟疾病、獲得性免疫缺陷綜合征、登革熱和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。然而，在HFRS患者中單核細(xì)胞亞型CD163的表達(dá)水平及血漿sCD163水平的變化尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，鑒于 CD163和sCD163在免疫應(yīng)答中的重要作用，我們推測(cè)CD163和sCD163在HFRS病程中可能發(fā)生了明顯變化，并與HFRS的發(fā)病機(jī)制有密切關(guān)系。為此，本研究擬觀察HFRS患

6、者外周血單核細(xì)胞亞型CD163的表達(dá)和血漿 sCD163的變化，進(jìn)一步分析 CD163、sCD163與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，為HFRS發(fā)病機(jī)制和臨床治療研究提供資料。
　　病例和方法：
　　收集第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院2011年10月至2014年1月期間收治的81例HFRS患者及15例正常人的PBMC和血漿。根據(jù)患者的病歷資料和HFRS診斷標(biāo)準(zhǔn)，將81名 HFRS患者劃分為輕型（12例）、中型（21例）、重型（25例）、危重型（

7、23例）4組，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）定量檢測(cè)不同病期和病型患者血漿 sCD163水平，并對(duì)血漿 sCD163水平的動(dòng)態(tài)變化與病情有關(guān)的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)的相關(guān)性進(jìn)行了分析。進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)單核細(xì)胞亞型進(jìn)行鑒定，并分析各亞型單核細(xì)胞表面CD163的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.HFRS患者血漿sCD163的水平
　　HFRS患者發(fā)熱/低血壓休克期、少尿期、多尿期、恢復(fù)期及健康對(duì)照血漿sCD163檢測(cè)值的中位數(shù)（四

8、分位數(shù)間距）分別為3.75（2.65-6.46）mg/L、3.58（2.17-4.28） mg/L、2.43（1.69-3.09）mg/L、1.80（1.43-2.38）mg/L和0.87（0.66-0.99）mg/L。與正常對(duì)照相比，患者急性期（包括發(fā)熱期、低血壓/休克期及少尿期）血漿sCD163水平明顯升高（P＜0.0001），恢復(fù)期（多尿期、恢復(fù)期）下降，但仍高于正常對(duì)照組（P＜0.0001）。HFRS不同病型組患者血漿sCD16

9、3水平呈現(xiàn)出急性期升高、恢復(fù)期降低的相同趨勢(shì)，尤其是重型/危重型組變化更為明顯。在急性期29例輕型/中型患者血漿sCD163水平僅有4例（13.7%）超過(guò)4 mg/L，而46例重型/危重型患者血漿sCD163水平有28例（51.5%）例超過(guò)4 mg/L，是輕型/中型HFRS患者血漿sCD163水平的4.3倍。對(duì)HFRS患者血漿sCD163水平與指示HFRS患者病情嚴(yán)重程度的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)和反應(yīng)機(jī)體炎癥程度的細(xì)胞因子進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)升高的

10、血漿sCD163與外周血血小板計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.6109，P＜0.0001），與白細(xì)胞計(jì)數(shù)（r=0.5322，P＜0.0001）、血肌酐水平（r=0.3718，P＜0.0001）、血尿素氮水平（r=0.38，P＜0.0001）、血漿IL-6水平（r=0.4837，P＜0.0001）、血漿IFN-γ水平（r=0.4929，P＜0.0001）呈顯著正相關(guān)。
　　2. HFRS患者單核細(xì)胞亞群變化
　　根據(jù)FCS-A和SSC

11、-A及單核細(xì)胞表面CD14、CD16表達(dá)水平，將單核細(xì)胞分為經(jīng)典單核細(xì)胞(CD14++CD16-)，中間單核細(xì)(CD14++CD16+)和非經(jīng)典單核細(xì)胞(CD14+CD16++)。與正常對(duì)照相比中間單核細(xì)胞（CD14++CD16+）的比例在急性期明顯升高（P＜0.0001），然而，經(jīng)典單核細(xì)胞（CD14++CD16-）與非經(jīng)典單核細(xì)胞（CD14+CD16++）的比例在急性期明顯下降（P＜0.0001）。在急性期三種單核細(xì)胞CD163的表

12、達(dá)水平均升高，但是中間單核細(xì)胞升高最明顯（P＜0.0001）。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)血漿sCD163與中間單核細(xì)胞的比例(r=0.5779，P＜0.0001)及CD163在中間單核細(xì)胞的表達(dá)水平(r=0.6245，P＜0.0001)呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　HFRS患者病程中血漿sCD163水平明顯升高，單核細(xì)胞亞型的比例及CD163在其上的表達(dá)也呈現(xiàn)明顯改變，這些變化在HFRS患者急性期最明顯。并與指示HFRS患者病情嚴(yán)重程度的