中國居民EDCs膳食暴露概率評(píng)估及低劑量BPA致雄性大鼠生殖毒性的研究.pdf

1、隨著人們對(duì)環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（Endocrine disrupting chemicals，EDCs）造成健康損害的認(rèn)識(shí)日益深入，相關(guān)國際組織適時(shí)、有針對(duì)性地制訂了部分EDCs暴露的單一限量標(biāo)準(zhǔn)，如歐盟確定雙酚A及炔雌醇的每日可耐受攝入量均為50μg/kg.d、丹麥推薦壬基酚每日可耐受量為5μg/kg.d，但仍有越來越多的人們對(duì)日常生活中長(zhǎng)期、低劑量（共）暴露EDCs的潛在健康風(fēng)險(xiǎn)表示擔(dān)憂。為探討人們生活中低劑量、長(zhǎng)期（共）暴露EDCs是

2、否可導(dǎo)致健康風(fēng)險(xiǎn)，我們開展了相關(guān)研究：
　　第一部分市售食品中EDCs的含量與分布
　　目的：建立一套高效率的可用于食物中多種EDCs檢測(cè)的樣品處理、目標(biāo)物提取、凈化及儀器檢測(cè)方法體系，監(jiān)測(cè)我國多個(gè)地區(qū)常見食品中主要EDCs的含量和分布，為食品中EDCs污染來源的追溯及控制提供參考，為我國居民膳食暴露EDCs的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　方法：按照我國河流流域的地理特點(diǎn)，采集珠江、長(zhǎng)江及黃河中下游重要城市（廣州、武漢和

3、濟(jì)南）市售食品樣品450件，樣品經(jīng)適當(dāng)前處理去除樣品中的基質(zhì)，富集、濃縮目標(biāo)化合物后，用LC-MS/MS方法同步檢測(cè)樣品中壬基酚（NP），雙酚A（BPA），辛基酚（OP），17-β雌二醇（E2），炔雌醇（EE2），雌酮（E1），雌三醇（E3）和己烯雌酚（DES）的含量。以雌激素等效因子（EEF）計(jì)算食物中總雌激素當(dāng)量（∑EEQ）并于E2檢出水平比較，衡量雌激素“共暴露”現(xiàn)象對(duì)潛在風(fēng)險(xiǎn)的影響。
　　結(jié)果：（1）按照優(yōu)化的前處理及LC

4、-MS/MS檢測(cè)條件、參數(shù)，可有效地實(shí)現(xiàn)前述8種EDCs的液相分離和質(zhì)譜檢測(cè)，EDCs各組分標(biāo)準(zhǔn)系列均呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。（2）除E1外，檢測(cè)范圍內(nèi)的其它EDCs成分，在不同城市的各類食品中均有不同程度檢出，檢出率在不同食品類別中存在差別。在廣州、武漢及濟(jì)南三個(gè)城市中，EDCs檢出率的高低順位均表現(xiàn)出NP>BPA>EE2的現(xiàn)象。（3）Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，在眾多EDCs組分檢出水平中，NP與OP、EE2與OP、BPA與OP

5、、EE2與NP、BPA與NP、BPA與EE2、E2與E3等均表現(xiàn)為低度正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）。（4） Wilcoxon法比較食物總雌激素當(dāng)量（∑EEQ）與E2檢出水平的差別，“共暴露”時(shí)可放大接觸的雌激素劑量達(dá)到E2水平的4倍（P<0.05）。（5）對(duì)應(yīng)分析(Correspondence analysis，CA)顯示，不同類別的食物中傾向性污染的EDCs種類存在差異。
　　結(jié)論：本研究系統(tǒng)建立了食物中EDCs多組分同步檢測(cè)的L

6、C-MS/MS方法，并運(yùn)用建立的方法對(duì)中國居民市售食品中EDCs的含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。結(jié)果顯示，市售食品中EDCs單組分的含量水平均較低，且不同地區(qū)具有相似的含量特征但不同食物種類中污染的EDCs組分存在差異性和傾向性，EDCs單組分間的正相關(guān)關(guān)系提示我們居民經(jīng)食物攝入EDCs往往是處于一種“共暴露”的狀態(tài)，且“共暴露”可能放大其健康效應(yīng)。
　　第二部分檢出EDCs的膳食暴露概率評(píng)估
　　目的：基于前述監(jiān)測(cè)獲得的食品中EDCs含量

7、數(shù)據(jù)，結(jié)合2002年中國居民膳食調(diào)查報(bào)告中的食物消費(fèi)量數(shù)據(jù)，運(yùn)用蒙特卡洛計(jì)算方法對(duì)中國居民經(jīng)食物暴露EDCs的水平進(jìn)行概率模擬，為風(fēng)險(xiǎn)分析及風(fēng)險(xiǎn)管理提供決策依據(jù)。
　　方法：根據(jù)專業(yè)知識(shí)確定人群膳食暴露EDCs的數(shù)學(xué)計(jì)算模型后，運(yùn)用Software Crystal Ball11.0對(duì)數(shù)學(xué)模型中的變量（EDCs水平、食物消費(fèi)數(shù)據(jù)、體重等）進(jìn)行參數(shù)模擬，以模擬的參數(shù)描述變量分布特征并納入后續(xù)計(jì)算，利用計(jì)算機(jī)按參數(shù)指定的規(guī)則模擬抽樣并迭

8、代計(jì)算，每一次迭代計(jì)算的結(jié)果則視為樣本中某一個(gè)體的暴露水平，當(dāng)?shù)螖?shù)足夠多時(shí)則個(gè)體EDCs暴露水平的頻數(shù)分布趨于穩(wěn)定，再根據(jù)個(gè)體暴露水平的頻數(shù)分布圖進(jìn)行概率分析。
　　結(jié)果：經(jīng)過人群EDCs暴露水平的概率模擬，三個(gè)地區(qū)居民經(jīng)膳食平均暴露及高暴露NP、BPA和EE2場(chǎng)景下的水平并無本質(zhì)差別，且均遠(yuǎn)低于推薦的容許每日攝入量水平，如95％的居民膳食暴露 BPA的水平分別為0.27μg/kg.d（廣州）、0.28μg/kg.d（武漢）和

9、0.26μg/kg.d（濟(jì)南），遠(yuǎn)低于其推薦限量標(biāo)準(zhǔn)（50μg/kg.d）。結(jié)論：在食物中現(xiàn)有EDCs含量水平及我國居民現(xiàn)有飲食習(xí)慣的前提下，單獨(dú)考慮膳食途徑、暴露單種EDCs，尚不足以達(dá)到推薦的限量標(biāo)準(zhǔn)。綜合前述“共暴露”的客觀事實(shí)及雌激素等效性的理論，我們?nèi)杂斜匾_展多途徑、多物質(zhì)同時(shí)暴露的研究。
　　第三部分低劑量BPA對(duì)雄性大鼠生殖毒性的影響
　　目的：模擬人群長(zhǎng)期、低劑量暴露雙酚A的特征，建立低劑量雙酚A的雄性大鼠

10、染毒模型，在觀察低劑量雙酚A致模型大鼠及其子代空間記憶行為損傷的同時(shí)，進(jìn)一步探討其生殖毒性。
　　方法：30d齡雄性Wistar大鼠30只經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后，隨機(jī)等分為對(duì)照組、10μg/kg.d及50μg/kg.d BPA等3組，對(duì)照組為玉米油溶劑，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按常規(guī)記錄進(jìn)食量和體重。各組大鼠干預(yù)8周后，同正常90天齡、發(fā)情期雌鼠進(jìn)行交配。交配成功1周后，所有父系大鼠進(jìn)行水迷宮測(cè)試一周后處死，取血液及睪丸、附睪組織檢測(cè)。LC-MS/M

11、S法檢測(cè)大鼠血清BPA含量以評(píng)估動(dòng)物模型，觀察睪丸、附睪臟器系數(shù)及精子畸形率同時(shí)，對(duì)睪丸組織病理形態(tài)學(xué)進(jìn)行觀察，TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)睪丸組織細(xì)胞凋亡，免疫組化技術(shù)觀察睪丸組織PCNA的表達(dá)水平及組織蛋白泛乙酰化表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）各組大鼠進(jìn)食量及體重增長(zhǎng)差異無顯著性（P>0.05），但經(jīng)BPA干預(yù)后，各組大鼠血清BPA水平差異有顯著性（P<0.05）。（2）與對(duì)照組比較，50μg/kg.d BPA染毒雄性大鼠的逃避潛伏期、游

12、泳速度、游泳距離以及目標(biāo)象限停留時(shí)間等差異均有顯著性（P<0.05），而子代大鼠僅表現(xiàn)出逃避潛伏期、游泳速度和游泳距離存在差異（P<0.05）；10μg/kg.d BPA染毒大鼠及其子代上述指標(biāo)差異均無顯著性。（3）各組大鼠睪丸、附睪臟器系數(shù)及精子畸形率差異并無顯著性（P>0.05）。（4）HE染色、TUNEL實(shí)驗(yàn)及PCNA免疫組化結(jié)果顯示，睪丸組織細(xì)胞凋亡變化無顯著性（P>0.05），但50μg/kg.d BPA染毒雄性大鼠睪丸組織生