復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記STR-PCR定量檢測技術(shù)在異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)中的應(yīng)用.pdf

1、目的:利用微衛(wèi)星片段(Shorttandem repeat，STR)遺傳多態(tài)性的特點，結(jié)合聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction，PCR)和毛細(xì)管電泳技術(shù)，采用復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記短串聯(lián)重復(fù)序列STR-PCR結(jié)合毛細(xì)管電泳檢測15個STR基因座和1個性別位點的方法，建立異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)(A110geneic stemcell transplantation，Allo-HSCT)后嵌合體組成的定量檢測方法。分

2、別檢測骨髓(Bonemarrow　transplantation，BMT)聯(lián)合外周血造血干細(xì)胞術(shù)(Peripheralblood stem cell transplantation，PBSCT)或單純PBSCT 后30天造血細(xì)胞嵌合體組成情況以及非血緣臍血移植(Unrelated Cord blood transplantation，UCBT)后30天內(nèi)造血細(xì)胞嵌合體的動態(tài)變化，判斷移植物植入情況，同時在移植術(shù)后長期跟蹤檢測造血細(xì)胞嵌合

3、體組成以評價疾病狀態(tài)、預(yù)測疾病轉(zhuǎn)歸等，并將此方法和其他臨床檢測手段相比較，觀察其實際臨床應(yīng)用價值。 方法:建立識別個體的熒光標(biāo)記復(fù)合PCR擴(kuò)增STR位點結(jié)合毛細(xì)管電泳檢測嵌合體方法，使用Promage公司的PowerPlexl6個體識別試劑盒擴(kuò)增熒光標(biāo)記多重STR，特異性STR位點選擇包括：D3S1358、THOl、D21S11、D18S5l、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSFlP

4、O、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、FGA 15個基因座和1個性別基因Amelogenin。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)ABI。公司的3100型遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，GenScan 等分析軟件分析數(shù)據(jù)，檢測異基因造血干細(xì)胞移植術(shù)后移植受者造血細(xì)胞嵌合體組成情況，判斷移植物植入情況，同時，在定性檢測的基礎(chǔ)上，依據(jù)毛細(xì)管電泳后DNA信息峰曲線下面積的大小，定量計算供者細(xì)胞的嵌合率。用此技術(shù)檢測2006年至2007年間在安徽省立醫(yī)院血液科接

5、受Allo-HSCT術(shù)的44例血液系統(tǒng)惡性腫瘤患者移植后不同時間點造血細(xì)胞嵌合體組成情況。 結(jié)果：35例Allo-HSCT受者(其中33例BMT聯(lián)合PBSCT、2例PBSCT)檢測移植后30天造血細(xì)胞嵌合體組成以判斷移植物植入情況，9例UCBT患者連續(xù)檢測移植后30天內(nèi)(移植后7、14、21、30天)造血細(xì)胞嵌合體組成變化，并同時和相應(yīng)的外周血象比較，以觀察移植物的植入規(guī)律并提前預(yù)測移植效果。移植后定期跟蹤檢測移植受者造血細(xì)胞

6、嵌合體變化以預(yù)測移植物永久植入情況和疾病結(jié)果全部移植受者在移植后不同時間點經(jīng)復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記STR-PCR定量技術(shù)檢測造血細(xì)胞嵌合體組成中均檢測到供者成分。35例BMT/PBSCT受者全部獲得造血重建，34例移植受者術(shù)后30天經(jīng)STR-PCR定量技術(shù)檢測造血細(xì)胞嵌合體組成呈完全供者型(Full donor chimera，F(xiàn)DC)，1例63歲ALL患者行減低強(qiáng)度PBSCT，移植后30天嵌合體呈混合嵌合(Mixed chimera，MC)

7、，移植后90天嵌合體呈FDC。9例UCBT受者在移植后不同時間均檢測到供者成分，發(fā)現(xiàn)獲得造血重建的7例移植受者，在移植后7天造血未恢復(fù)外周血中嵌合體均呈FDC，而2例未獲得造血重建受者移植后7天嵌合體呈MC，移植后30天外周血和骨髓中均未檢測到供者基因成分。跟蹤隨訪中，7例骨髓復(fù)發(fā)患者均提前出現(xiàn)嵌合體中供者成分減低的現(xiàn)象，2例髓外復(fù)發(fā)患者其嵌合體仍呈FDC。 結(jié)論:1，復(fù)合擴(kuò)增熒光標(biāo)記STR-PCR結(jié)合毛細(xì)管電泳技術(shù)能準(zhǔn)確有效

8、地判斷出Al 10-HSCT術(shù)后早期移植物植入狀況，并能連續(xù)動態(tài)監(jiān)測移植后移植物永久植入情況，及時預(yù)測疾病的轉(zhuǎn)歸，為臨床早期干預(yù)治療提供可靠的實驗依據(jù)；2，LJCBT后30天內(nèi)連續(xù)檢測嵌合體組成情況，在外周血象尚未恢復(fù)時(移植后7天)即可提前預(yù)測移植物被植入，與沿用的移植成功指標(biāo)ANC具有很好的關(guān)聯(lián)性，并可揭示臍血移植植入動力學(xué)的規(guī)律，該技術(shù)可作為早期評估IJCBT是否成功最靈敏特異的指標(biāo)。3，該方法靈敏度高、特異性強(qiáng)、標(biāo)本需要量少、適