異基因造血干細胞移植患者CMV特異性CTL的檢測研究.pdf

1、目的：巨細胞病毒(CMV)是皰疹病毒科β屬的DNA病毒，在自然界中廣泛存在，正常人群中自然感染普遍。在免疫功能正常的人群中，通常在產(chǎn)生輕的、無癥狀感染后，病毒處于潛伏狀態(tài)，稱CMV潛伏感染。然而對異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)患者而言，由于預處理中的大劑量放/化療以及移植后移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生和免疫抑制劑的應用，使機體的免疫功能受到嚴重破壞，包括對CMV特異性的細胞免疫，從而使機體無法清除體內(nèi)激活的CMV，導致C

2、MV活動性感染和CMV疾病。雖然有抗病毒藥物如更昔洛韋、磷甲酸鈉等的應用，allo-HSCT后CMV疾病的發(fā)病率仍高達5％-18％，病死率30％-50％，仍然是移植后的重要死亡原因之一。 既往對患者移植后細胞免疫重建的研究主要局限于T細胞及其亞群數(shù)量的重建，以及近年來利用定量聚合酶鏈反應(PCR)檢測T細胞中的T細胞受體重組刪除環(huán)(TREC)出現(xiàn)的頻率，從而評估HSCT后胸腺功能，也是臨床一種較可靠的觀察細胞免疫功能重建情況的檢

3、測手段。但是T細胞及其亞群數(shù)量的重建只是細胞免疫重建的一部分，而T細胞功能的重建對評估移植后細胞免疫重建更為重要。既往多采用T細胞增殖試驗和T細胞分泌的細胞因子等手段來測定T細胞功能，這些檢測結果僅能粗略評估T細胞在非特異性細胞免疫方面的功能。 機體對CMV的清除主要依賴細胞免疫，尤其是CD8+細胞毒性T淋巴細胞(CTL)對感染細胞的殺傷來完成，故CTL在抗CMV感染中起重要作用。如何更加精確的評估移植后患者對CMV特異性細胞免

4、疫狀態(tài)，對指導抗CMV治療有現(xiàn)實意義，有助于避免對所有移植后患者常規(guī)持續(xù)給予抗CMV藥物而影響CMV特異性細胞免疫重建，并可以指導合理撤減免疫抑制劑和應用特異性免疫增強劑，對移植患者移植后CMV感染的防治策略的調(diào)整和預后監(jiān)測，具有重要的臨床意義。為了監(jiān)測CMV特異性CTL的活性及其介導的細胞免疫應答的發(fā)展與轉歸，以便對移植患者移植后的CMV特異性細胞免疫狀態(tài)有直觀準確的了解，這就需要直接對CMV特異性CTL的檢測(包括細胞的數(shù)量、功能及

5、活性狀態(tài))，而不能僅僅依靠檢測T細胞及其亞群數(shù)量重建和評價非特異性細胞免疫功能的這些一般性的方法和技術。 本課題擬通過MHCⅠ類分子-抗原肽復合物多聚體法和ELISPOT兩種方法，檢測CMV特異性CTL數(shù)量和功能，了解allo-HSCT患者移植后CMV特異性T細胞重建的變化規(guī)律，以求輔助預測allo-HSCT患者移植后CMV易感的可能性，指導臨床醫(yī)師對CMV易感的高危患者給予及時的、適當?shù)念A防性治療，避免對所有移植后患者常規(guī)持續(xù)

6、給予抗CMV藥物，為臨床制定合理的CMV感染防治方案提供依據(jù)。 結論： (一)本研究采用的五聚體法檢測健康供者HLA-A2限制性CMVpp65495-503特異性CTL的絕對值和比例略高于國外類似報道，供者CMV-Ag(+)對受者移植后的CMV特異性CTL重建有可能是一個正面因素。 (二)本組患者HLA-A2限制性CMVpp65495-503特異性CTL在移植后12月內(nèi)呈持續(xù)增長的趨勢，其中3～6月期內(nèi)增長較快，