異基因造血干細(xì)胞移植患者外周血單個核細(xì)胞NF-κB表達(dá)水平的研究.pdf

1、背景：異基因造血干細(xì)胞移植(Allogeneic laematopoietic stem celltransplantation，allo-HSCT)已成為治療惡性血液病、再生障礙性貧血、自身免疫性疾病、某些遺傳性疾病及實(shí)體腫瘤的一種重要手段。而移植物抗宿主病(graft-verse-host disease，GVHD)是allo-HSCT后主要并發(fā)癥和死亡的原因之一。GVHD的發(fā)生分為3個過程：(1)由于預(yù)處理方案毒性、感染或原發(fā)病引

2、起細(xì)胞損傷，使HLA抗原在靶組織上表達(dá)增加；(2)供者T淋巴細(xì)胞在受者體內(nèi)識別組織相容抗原并被激活，然后活化的供者T淋巴細(xì)胞增殖，并表達(dá)IL-2受體(CD25)、分泌IL-2；(3)IL-2激活供者骨髓中新植活的單個核細(xì)胞分泌更多的炎性細(xì)胞因子，引發(fā)細(xì)胞因子瀑布式暴發(fā)，直接導(dǎo)致GVHD的各種病理損害。其中，供者T淋巴細(xì)胞的激活和增殖是發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 轉(zhuǎn)錄因子NF-кB在樹突狀細(xì)胞(DC)的成熟和T淋巴細(xì)胞的激活中起到關(guān)鍵性作用

3、，它已經(jīng)被多個試驗(yàn)證實(shí)在細(xì)胞因子信號通路和細(xì)胞免疫中起著樞紐作用。蛋白酶體抑制劑萬珂已被證實(shí)具有多種生物學(xué)活性，包括抑制NF-кB的活化。Blanco的研究發(fā)現(xiàn)萬珂能誘導(dǎo)同種異體反應(yīng)性T細(xì)胞的凋亡并降低Th1細(xì)胞的反應(yīng)。Sun等的研究還發(fā)現(xiàn)萬珂在小鼠異基因骨髓移植模型中使之免于致死性的急性GVHD。這些結(jié)果均提示：NF-кB在GVHD病理生理學(xué)中的重要作用，并提示以抑制NF-кB為靶點(diǎn)可能是減輕GVHD的有效策略。然而對NF-кB和病人

4、GVHD的相關(guān)性的研究卻很少。因此，對異基因造血干細(xì)胞移植患者NF-кB表達(dá)水平和GVHD相關(guān)性的臨床研究，有助于分析NF-кB在急性GvHD中的作用，以及針對NF-кB來干預(yù)GVHD提供一定的依據(jù)。 研究目的：本文探討異基因造血干細(xì)胞移植患者外周血單個核細(xì)胞NF-кB表達(dá)水平與急性GVHD以及血清膽紅素、感染等因素的關(guān)系。 實(shí)驗(yàn)方法：選擇四川大學(xué)華西醫(yī)院2006年9月-2007年4月接受異基因造血干細(xì)胞移植的16例患者

5、為研究對象，同時取22名健康志愿者作為正常對照。病例資料：急性髓細(xì)胞白血病(AML)2例；急性淋巴細(xì)胞白血病((ALL)2例；慢性髓性白血病(CML)12例。同胞HLA完全相合移植15例，無關(guān)供者HLA完全相合移植1例。患者中位年齡37歲，男13例，女3例。采移植后2～3周血常規(guī)白細(xì)胞數(shù)>1×10<'9>/L的病人外周靜脈血3-5ml，人淋巴細(xì)胞分離液分離出單個核細(xì)胞，用TIizol提取出總RNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過RT-PCR檢測

6、NF-кB的表達(dá)水平。臨床記錄患者在移植后與GVHD相關(guān)的癥狀、護(hù)理記錄及血常規(guī)、生化等檢驗(yàn)結(jié)果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)異基因造血干細(xì)胞移植(Allo-HSCr)患者外周血單個核細(xì)胞的NF-кB平均表達(dá)水平為0.3869，正常對照組平均表達(dá)水平為0.1627，兩者差異顯著：p<0.01。 (2)發(fā)生aGVHD患者的NF-кB平均表達(dá)水平高于沒有發(fā)生aGVHD的患者，p<0.025。沒有發(fā)生GVHD的病人NF-кB的

7、平均表達(dá)水平與正常人相比統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異，p>0.05。 (3)患者膽紅素與NF-kB表達(dá)水平的線性相關(guān)系數(shù)為+0.4927，兩者有一定程度的線性正相關(guān)，p<0.05。 (4)患者aGvHD程度與NF-кB的表達(dá)水平的Spearman秩相關(guān)系數(shù)為+0.46，查表得p<0.05，說明兩者具有一定的相關(guān)關(guān)系。 (5)感染對NF-кB的表達(dá)水平影響：發(fā)生GVHD的病人的NF-кB平均表達(dá)水平明顯高于沒有發(fā)生GVHD的

8、病人，由于研究的16例病人都存在輕重不一的感染，沒有發(fā)生GVHD的病人的感染相對輕，而發(fā)生GvHD的病人的感染相對較重，所以不能排除重癥感染的影響。 結(jié)論：異基因造血干細(xì)胞移植(Allo-HSCT)患者外周血單個核細(xì)胞內(nèi)NF-кB的平均表達(dá)水平比正常對照組明顯增高，兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。發(fā)生aGVHD的患者的NF-кB平均表達(dá)水平高于沒有發(fā)生aGVHD的患者(p<0.025)；NF-кB的表達(dá)水平與aGVHD