貞芪益肝方對(duì)急性免疫性肝損傷保護(hù)作用的臨床與實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行，已成為嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題。研究認(rèn)為，HBV誘導(dǎo)的機(jī)體適應(yīng)性免疫是造成肝臟炎癥的罪魁禍?zhǔn)?，而非HBV本身。免疫機(jī)制是慢性乙型肝炎發(fā)病的主要機(jī)制。目前該病的主要治療手段有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、改善肝功能和抗肝纖維化等?？共《舅幬锇ê塑眨ㄋ幔╊愃莆锖透蓴_素。但核苷（酸）類似物易導(dǎo)致病毒變異;干擾素適應(yīng)面窄，副作用大，價(jià)格昂貴，遠(yuǎn)期療效欠佳。且這些藥物對(duì)作為病毒RNA復(fù)制模板的

2、共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)均無作用，難以徹底清除病毒，停藥后復(fù)發(fā)率較高。
　　導(dǎo)師認(rèn)為，慢性乙型肝炎是因機(jī)體正氣不足，濕熱疫毒侵襲而致。病變由氣入血，肝脾不調(diào)，故見腹脹、納呆及乏力;血脈受病，肝絡(luò)瘀阻，發(fā)為脅痛，膽汁內(nèi)淤，溢為黃疸。治療上應(yīng)扶正祛邪并舉。經(jīng)多年臨床實(shí)踐，創(chuàng)制出貞芪益肝方。全方由黃芪、女貞子、靈芝、田基黃、首烏藤、板藍(lán)根等12味藥物組成，具有益氣養(yǎng)陰、清熱利濕、解毒扶正的功效。對(duì)慢性乙型肝炎有較好的臨床療效。

3、為總結(jié)推廣該方，我們開展了該方治療急性免疫性肝損傷的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。臨床研究方面，通過和西藥恩替卡韋片的隨機(jī)對(duì)照研究，評(píng)價(jià)該方的臨床療效;實(shí)驗(yàn)研究方面，以尾靜脈注射刀豆蛋白A制備免疫性肝損傷動(dòng)物模型，分別從對(duì)肝細(xì)胞壞死、凋亡及再生作用方面評(píng)價(jià)該方療效，探討其抗肝損傷的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.臨床研究共觀察71例慢性乙型肝炎患者，治療組40例，用貞芪益肝方治療，每日一劑，每次煎服300ml，每天2次;對(duì)照組31例，用抗

4、病毒藥物恩替卡韋片治療，每次0.5mg，每日一次。兩組均治療6個(gè)月，分析治療前后的癥狀體征積分、肝功能及病毒學(xué)指標(biāo)變化情況。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究將120只雌性KM小鼠隨機(jī)分為6組:貞芪益肝方高、中、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組、模型組和正常對(duì)照組。除正常對(duì)照組外，其他各組予刀豆蛋白A(15mg/kg)尾靜脈注射制備急性免疫性肝損傷模型。造模成功后，貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組給予相應(yīng)藥物灌胃，模型組及正常對(duì)照組則給予等體積生理鹽水灌胃，共

5、治療7天。每天分別從各組中取3只小鼠，取血及肝臟標(biāo)本，應(yīng)用ELISA法檢測血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)水平;應(yīng)用免疫組化法檢測肝組織中Fas、FasL、Bax、Bcl-2、PCNA含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用重復(fù)測量方差分

6、析比較各組療效，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　成果:
　　1.臨床研究
　　兩組患者在性別、年齡、病史、病情分級(jí)、癥狀體征積分、肝功能、血清HBV-DNA水平等基線資料比較上無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。6個(gè)月后的臨床觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:①治療組和對(duì)照組均能改善患者的臨床癥狀及體征，治療組在改善患者的胃部滿悶、腹部脹滿、寐艱多夢(mèng)、大便粘滯和小便黃赤癥狀方面優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05）;②治療組和對(duì)照組均能促進(jìn)血清HB

7、eAg陰轉(zhuǎn)，降低血清HBV-DNA水平，改善患者肝功能，兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）;③在臨床療效比較方面，治療組總有效率為55％，對(duì)照組為51.6％，但兩組比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05）;④在證候療效比較方面，治療組總有效率為95％，對(duì)照組為77.4％，治療組優(yōu)于對(duì)照組(P＜0.05）。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究
　　(1)貞芪益肝方對(duì)小鼠血清ALT、AST水平的影響經(jīng)刀豆蛋白處理后，與正常對(duì)照組比較，模型組、貞芪益

8、肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組血清ALT和AST水平均不同程度升高(P＜0.01)。與模型組比較，貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組血清ALT及AST升高幅度減少，在血清AST降低幅度上，高劑量組優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(2)貞芪益肝方對(duì)小鼠血清MDA、SOD水平的影響經(jīng)刀豆蛋白處理后，與正常對(duì)照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組血清MDA水平均不同程度升高，SOD水平均不同程度降低（P＜0.01）。與模型組比較，

9、高中低劑量組及聯(lián)苯雙酯組血清MDA升高幅度及SOD降低幅度減少。在血清SOD降低幅度上，高劑量組優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(3)貞芪益肝方對(duì)小鼠血清TNF-a、IFN-γ、IL-4、IL-6及IL-10水平的影響經(jīng)刀豆蛋白處理后，與正常對(duì)照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組血清TNF-a、IFN-γ、IL-6水平均有不同程度升高，IL-4、IL-10水平均有不同程度降低（P＜0.01）。與模型組相比，貞芪益

10、肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組升高及降低幅度均減少。除血清IFN-γ外，高劑量組優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組(P＜0.05)。
　　(4)貞芪益肝方對(duì)小鼠肝組織Fas、FasL、Bax、Bcl-2、PCNA含量的影響經(jīng)刀豆蛋白處理后，與正常對(duì)照組比較，模型組、貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組Fas、FasL、Bax、PCNA表達(dá)水平均不同程度升高，BCL-2表達(dá)水平不同程度下降（P＜0.01）。與模型組比較，貞芪益肝方各劑量組及聯(lián)苯雙酯組Fas、Fas

11、L、Bax、PCNA表達(dá)水平升高，BCL-2表達(dá)水平下降;在PCNA表達(dá)水平方面，貞芪益肝方高劑量組優(yōu)于聯(lián)苯雙酯組。
　　(5)肝臟病理學(xué)觀察:正常對(duì)照組肝小葉中央可見中央靜脈，小葉中可見肝細(xì)胞組成的肝板結(jié)構(gòu)，肝板之間為肝血竇;模型組肝小葉中可見大片狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細(xì)胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)破壞;貞芪益肝方高劑量組和聯(lián)苯雙酯組肝小葉中肝細(xì)胞腫脹明顯呈氣球樣改變;貞芪益肝方中劑量組肝小葉中可見點(diǎn)狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細(xì)胞浸潤;貞芪

12、益肝方低劑量組肝小葉中央靜脈周圍可見點(diǎn)狀壞死區(qū)域，周圍可見炎性細(xì)胞浸潤。
　　結(jié)論:
　　1.臨床研究
　　貞芪益肝方能改善慢性乙型肝炎患者的臨床癥狀體征及肝功能;降低病毒載量;有較高的血清轉(zhuǎn)換率;能有效治療慢性乙型肝炎。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究:
　　(1)小鼠經(jīng)尾靜脈注射刀豆蛋白A后，8小時(shí)后血清ALT及AST水平明顯升高，造模成功。
　　(2)應(yīng)用貞芪益肝方后，與模型組相比，小鼠血清ALT及AST水平

13、明顯降低，說明貞芪益肝方對(duì)免疫性肝損傷小鼠模型具有保護(hù)作用，具有顯著的保肝降酶作用。
　　(3)應(yīng)用貞芪益肝方后，與模型組相比，小鼠血清MDA水平升高及SOD降低幅度減少，說明貞芪益肝方具有抗氧化、減輕肝損傷的作用。
　　(4)應(yīng)用貞芪益肝方后，與模型組相比，血清TNF-a、IFN-γ及IL-6水平升高幅度及IL-4和IL-10降低幅度均減少，病理損害減輕。說明貞芪益肝方可能通過下調(diào)促炎因子，上調(diào)抑炎因子，調(diào)節(jié)Th1/Th2