牛黃參膠囊對小鼠免疫性肝損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 本實驗針對病毒性肝炎發(fā)病的免疫學機制，采用卡介苗(BCG)加酯多糖(LPS)聯(lián)合誘導的免疫性肝損傷模型，通過測定動物血清ALT、AST值、肝組織超氧化物歧化酶(SOD)活力、脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)的含量、肝組織病理形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)、過氧化損傷及免疫調(diào)節(jié)等途經(jīng)，并做統(tǒng)計分析，評價牛黃參膠囊對免疫性肝損傷保護作用的效果，并探討其作用機制，為牛黃參膠囊抗免疫性肝損傷提供了科學依據(jù)，并為牛黃參膠囊的進一步開發(fā)應(yīng)用提供依

2、據(jù)。
　　 方法:
　　 將60只昆明小鼠隨機分為正常組、BCG加LPS模型組、聯(lián)苯雙酯組、牛黃參膠囊高、中、低劑量組，每組10只。具體方法：按體重將60只小鼠編為1--60號，用DPS7.55統(tǒng)計軟件進行處理：試驗設(shè)計→完全隨機分組→實驗樣本數(shù)60，分組組數(shù)6→確定，隨機分為6組。
　　 實驗室喂養(yǎng)一周，參考文獻方法造模，除正常對照組外，其余組第一天均尾靜脈注射BCG2.5mg/0.2ml.只(約5×107個活

3、菌)造模。正常對照組、BCG加LPS模型組，自來水0.5ml/只，ig10天；聯(lián)苯雙酯組劑量12mg/kg，ig10天。牛黃參膠囊高、中、低劑量組分別給予牛黃參膠囊內(nèi)容物水溶液以3400mg/kg、1700mg/kg、850mg/kg灌胃10天。除正常對照組外，各組動物均于末次給藥后，尾靜脈注射LPS7.5μ g/0.2ml.只。具體方法：先將小鼠固定于小鼠固定器內(nèi)，讓尾部全部露到固定器外，用75％乙醇擦拭尾部，使其充血。選擇一根最為充

4、盈的血管，用左手捏住尾巴的末端，右手持裝有四號針頭的注射器，以30°角進行靜脈穿刺推注藥液無阻力感，且可見沿靜脈血管出現(xiàn)一條白線，則表明針頭確實在血管內(nèi)，即可繼續(xù)推完藥液。注射完畢后，拔出針頭，輕按注射部位止血。注射后禁食不禁水，10小時后，進行模型處理。小鼠用0.03g/10g水合氯醛麻醉后，眼眶取血1.0ml，以無菌試管采集，離心血清，上全自動血生化儀，檢測ALT、AST水平。采血前稱小鼠體重，采血后斷頭處死小鼠，小鼠處死后取肝組織

5、，用20％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，行HE染色，光鏡觀察組織病理，參照免疫性肝損傷實驗研究相關(guān)文獻和肝組織形態(tài)學相關(guān)研究文獻資料，根據(jù)肝組織炎癥、壞死及出血程度，將肝組織病理改變分級。
　　 切取左前葉肝組織0.5-1.0 g，冷生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱重，冰浴中制成10％肝勻漿，以4000轉(zhuǎn)/min，低溫離心15分鐘，取上清液。按步驟測定SOD活性，檢測丙二醛含量，其操作步驟按試劑盒說明書進行。TNF-α活性、IL-6活性

6、檢測采用ELISA法，按試劑盒說明操作。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(X±S)表示，組內(nèi)比較：t檢驗；組間比較：方差分析。P<0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析。
　　 結(jié)果:
　　 (1)各治療組ALT、AST值較模型組明顯降低(P<0.05)，說明牛黃參膠囊能有效防止免疫性肝損傷引起的肝功能減退。
　　 (2)各治療組病理結(jié)構(gòu)明顯優(yōu)于模型組(P<0.05)，證明牛黃參膠囊能有效防止BCG

7、加LPS對小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的免疫性損傷。
　　 (3)各治療組肝組織勻漿SOD活性明顯高于模型組，MDA含量明顯低于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，說明牛黃參膠囊具有抗氧化、清除自由基的作用。
　　 (4)各治療組TNF-α、IL-6的含量明顯低于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，說明牛黃參膠囊抗肝損傷的作用可能與其抑制細胞毒因子TNF-α、IL-6的釋放有關(guān)。
　　 (5)中劑量組牛黃參膠囊的