氫鹽水對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 氧化應(yīng)激在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中有著重要的作用。氧化應(yīng)激主要是因?yàn)樽杂苫漠a(chǎn)生與清除失衡。生理情況下，體內(nèi)自由基不斷產(chǎn)生，也不斷被清除，使之維持在一個(gè)正常生理水平上，自由基過多或過少均會(huì)給機(jī)體造成不利影響甚至傷害。生物體內(nèi)自由基類型有很多，研究比較多的是氧自由基和氮自由基。氧自由基包括超氧陰離子、單線態(tài)氧和羥自由基，常共稱為活性氧。比較重要的氮自由基有一氧化氮和過氧亞硝基陰離子。實(shí)驗(yàn)研究表明抑制自由基的

2、產(chǎn)生或通過生化反應(yīng)清除自由基可以保護(hù)肝損傷。
　　 研究表明氫氣能夠選擇性地清除羥自由基和亞硝酸陰離子(氧化損傷的最重要介質(zhì))，而對(duì)毒性作用較弱的過氧化氫和一氧化氮無(wú)效。研究人員在多種動(dòng)物模型上驗(yàn)證了呼吸氫氣對(duì)腦、心臟、肝臟的缺血再灌注損傷以及小腸移植都有保護(hù)性作用。但是通過呼吸道吸入氫氣的方法很不方便而且存在安全隱患，于是我們將氫氣通過高壓溶解于生理鹽水中(簡(jiǎn)稱氫鹽水)，同樣這種含有氫氣的生理鹽水在腦缺血再灌注損傷動(dòng)物模型中有

3、很好的保護(hù)作用。
　　 但氫鹽水是否對(duì)肝損傷有保護(hù)作用，本課題以Galn/LPS、CCl4、DEN三種肝損傷小鼠模型，驗(yàn)證氫鹽水對(duì)急、慢性肝損傷的保護(hù)作用；并初步探討其作用的可能機(jī)制。
　　 研究方法:
　　 1.運(yùn)用氫微電極，在體動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)注射氫鹽水后小鼠肝臟、腎臟等器官的氫濃度的改變。
　　 2.分別通過腹腔注射Galn/LPS、DEN和強(qiáng)飼CCl4建立小鼠急性肝損傷模型，不同的時(shí)間點(diǎn)收集血清及肝臟標(biāo)本

4、。
　　 3.運(yùn)用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中轉(zhuǎn)氨酶；酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)檢測(cè)血清中炎癥因子(TNF-α，IL-6)。
　　 4.HE、免疫組化檢測(cè)肝臟形態(tài)學(xué)改變、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 5.TUNEL法結(jié)合Western blot檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡。
　　 6.使用Western blot，ELISA及肝組織冰凍切片特異染色等方法開展氫鹽水發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制研究。
　　 7.強(qiáng)飼CCl4建立小鼠

5、肝硬化模型，通過形態(tài)學(xué)相關(guān)檢測(cè)及Western blot方法驗(yàn)證氫鹽水對(duì)肝纖維化的作用。
　　 8.小鼠腹腔注射DEN建立損傷模型，Edu試劑盒驗(yàn)證氫鹽水對(duì)肝細(xì)胞損傷后代償性增殖的作用。
　　 結(jié)果;
　　 (一)、經(jīng)腹腔注射氫鹽水后，小鼠肝臟、腎臟內(nèi)氫濃度5分鐘后達(dá)高峰，隨后慢慢降低，約40分鐘后恢復(fù)至正常水平。
　　 (二)、氫鹽水對(duì)Galn/LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用
　　 1.Gal

6、n/LPS誘導(dǎo)的急性肝損傷中，氫鹽水組轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)、炎癥因子(TNF-α、IL-6)水平較生理鹽水對(duì)照組明顯下降。
　　 2.HE、免疫組化檢測(cè)顯示氫鹽水對(duì)損傷后肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)有明顯保護(hù)作用，巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。
　　 3.氫鹽水組肝細(xì)胞凋亡明顯少于對(duì)照組。
　　 4.氫鹽水主要通過清除肝組織細(xì)胞內(nèi)ROS，抑制JNK磷酸化及caspas-3激活進(jìn)而抑制凋亡。
　　 (三)、在CCl4誘導(dǎo)的肝損