氫鹽水對兔脊髓缺血灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、一、研究目的
　　 脊髓損傷常導致患者肢體殘疾和心靈創(chuàng)傷。而且，脊髓損傷越來越多的出現(xiàn)于年輕人當中，給社會和家庭帶來了巨大的負擔。由于目前對于脊髓損傷的藥物治療有限，而且作用不甚明顯，因此，一直以來對脊髓損傷的治療都是臨床和基礎(chǔ)研究的重點。脊髓損傷過程分為原發(fā)損傷和繼發(fā)損傷，缺血再灌注損傷(spinal cord ischemic reperfusion injury，SCII)是造成脊髓繼發(fā)損傷的主要病理藎礎(chǔ)。在此過程中，自由

2、基對脊髓的繼發(fā)性損傷起了重要作用。研究顯示，氫能選擇性清除體內(nèi)羥自由基和過氧亞硝酸陰離子，對缺血/缺氧損傷產(chǎn)生治療作用。本研究擬建立脊髓缺血再灌注損傷的動物模型，選用氫鹽水對兔進行腹腔注射治療，通過檢測清除自由基、抑制神經(jīng)細胞凋亡和減輕炎癥反應等方面相關(guān)指標，探討氫鹽水對脊髓缺血再灌注損傷的保護作用機制。本研究為氫治療脊髓缺血再灌注損傷提供實驗證據(jù)，也為氧今后用于脊髓損傷的藥物治療提供理論依據(jù)。
　　 二、研究方法
　　

3、 (一)制備兔脊髓缺血再灌注損傷模型
　　 采用ZIVIN法，即直接于左腎動脈分支處遠端0.5cm處及左右骼動脈分支上端，以動脈夾完全鉗夾腹主動脈造成脊髓腰骶段缺血，夾閉35min后松開動脈夾，以建立脊髓缺血再灌注損傷模型。
　　 (二)實驗動物及分組
　　 新西蘭大白兔30只，分為3組：A組(假手術(shù)組10只)：只開腹而不夾閉腹主動脈；B組(對照組10只)：開腹并夾閉腹主動脈35min，于再灌注前5min腹腔注射

4、生理鹽水；C組(氫鹽水治療組10只)：開腹并夾閉腹主動脈35min，于再灌注前5min腹腔注射飽和氫鹽水。
　　 (三)兔后肢運動功能評價
　　 分別于術(shù)后6h、12h、24h、72h用單盲法觀察兔后肢運動功能，并參照Tarlov5分制標準進行評分。
　　 (四)組織病理學觀察
　　 于術(shù)后72h處死各組動物，取脊髓組織用10％福爾馬林中性溶液固定、脫水、切片，分別行HE染色和TUNNEL染色檢測，觀察脊

5、髓神經(jīng)細胞形態(tài)學變化和凋亡情況。
　　 (五)丙二醛(MDA)含量和過氧化氫酶(catalase，CAT)活性檢測
　　 丙二醛是細胞凋亡時細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應的產(chǎn)物，過氧化氫酶活性是組織抗氧化能力的主要指標之一。方法：處死動物時取脊髓組織勻漿、離心后取上清液分別用脂質(zhì)氧化(MDA)檢測試劑盒(lipid peroxidation MDA assay kit)和過氧化氫酶檢測試劑盒(catalase assay ki

6、t)檢測脊髓組織中相應指標。
　　 三、結(jié)果
　　 (一)后肢神經(jīng)功能評分結(jié)果
　　 于再灌注6h、12h、24h、72h觀察各組動物后肢運動功能。A組術(shù)后Tarlov評分無下降。B組和C組兔脊髓缺血再灌注損傷后Tarlov評分出現(xiàn)下降。C組兔脊髓缺血再灌注損傷后Tarlov評分顯著高于B組(P<0.01)。
　　 (二)脊髓組織病理學結(jié)果
　　 1、HE染色
　　 光鏡下觀察A組兔脊髓組

7、織灰白質(zhì)界限清楚，神經(jīng)細胞形態(tài)完整。B組兔脊髓組織灰白質(zhì)界限欠清楚，大量神經(jīng)細胞壞死，胞漿內(nèi)顆粒變性和空泡變性。C組神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)基本完整，核仁明顯，見少量神經(jīng)元細胞空泡變性。
　　 2、TUNNEL染色
　　 光鏡下觀察A組兔脊髓組織見未見神經(jīng)細胞凋亡；B組見脊髓組織破壞嚴重，大量凋亡的神經(jīng)細胞，核固縮，核濃染，大量炎性細胞浸潤；C組見脊髓組織少量凋亡細胞及少量炎性細胞浸潤。
　　 3、丙二醛(MDA)含量和過氧