抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一章刀豆球蛋白所致實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型的構(gòu)建 目的：構(gòu)建ConA誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型。 方法：Balb/C小鼠40只，分別尾靜脈注射ConA，根據(jù)注射劑量的大小，小鼠被隨機(jī)分為4組（每組10只）：A組為10mg/kg，B組為20mg/kg，C組為30mg/kg，另D組作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組尾靜脈僅注射生理鹽水。給藥后8h時(shí)觀察小鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性、死亡率和C組心、肺、腎、腦、肝組織的病理改變。選擇ConA劑

2、量，并觀察此劑量下不同時(shí)間點(diǎn)ALT活性、死亡率和肝組織的病理改變特點(diǎn)。 結(jié)果：A組和D組未見小鼠死亡，B組死亡3只小鼠，C組全部死亡。A組和B組ALT活性顯著高于D組。光鏡下A組可見肝細(xì)胞變性，B和C組可見肝組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì)胞變性、壞死，且以C組為甚。C組肺可見輕度充血、腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度空泡變性、而心、腦未見明顯異常。20mg/kgConA尾靜脈注射，小鼠死亡率、ALT活性、肝組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和肝細(xì)胞變性、壞死在一定

3、時(shí)間范圍內(nèi)（24h）隨著時(shí)間增加而加劇。 結(jié)論：1.成功構(gòu)建了ConA小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型。2.ConA小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型ConA最佳劑量為20mg/kg。 第二章抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)刀豆球蛋白所致肝損傷保護(hù)作用的觀察 第一節(jié)造模前12小時(shí)注射抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)刀豆球蛋白所致肝損傷保護(hù)作用的觀察 目的：探討造模前12小時(shí)（h）注射抑制性寡脫氧核苷酸（suppressive oligonucleotid

4、es，Sup ODN）對(duì)刀豆球蛋白A（ConA）所致小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機(jī)分為生理鹽水（NS）組、環(huán)孢霉素（CsA）組、對(duì)照寡脫氧核苷酸（Controloligonucleotides，ConODN）組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察10只小鼠。ConA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模前12h時(shí)每組分別給予NS（0.3mL/只）、ConODN

5、（20mg/kg）、CsA（130mg/kg）、SupODN（20mg/kg）腹腔給藥。給藥8h和24h時(shí)分別觀察小鼠的死亡率；采血檢測(cè)血清中TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性。RT-PCR檢測(cè)肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達(dá)，同時(shí)觀察肝組織的病理改變。 結(jié)果：與NS、ConODN組相比，SupODN組ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達(dá)明顯降低，IL-4含量明顯升高（

6、P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減輕（P<0.05）。 第二節(jié)造模同時(shí)注射抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)ConA所致肝損傷保護(hù)作用的觀察 目的：探討造模同時(shí)注射SupODN對(duì)ConA所致小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機(jī)分為NS組、CsA組、ConODN組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察10只小鼠。Co

7、nA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模同時(shí)每組分別給予NS（0.3mL/只）、ConODN（20mg/kg）、CsA（130mg/kg）、SupODN（20mg/kg）腹腔給藥。給藥8h和24h時(shí)分別觀察小鼠的死亡率；采血檢測(cè)血清TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及ALT活性。RT-PCR檢測(cè)肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達(dá)，同時(shí)觀察肝組織的病理改變。 結(jié)果：與NS、ConODN組相比，SupODN組ALT

8、活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達(dá)明顯降低，而IL-4含量明顯升高（P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減輕（P<0.05）。 第三節(jié)造模后2小時(shí)注射抑制性寡脫氧核苷酸對(duì)ConA所致肝損傷保護(hù)作用的觀察 目的：探討造模后2h注射SupODN對(duì)ConA所致小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用。 方法：雌性Balb/C小鼠80只隨機(jī)分為NS、，CsA組、ConODN

9、組、SupODN組，每小組又分8h和24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察10只小鼠。ConA（20mg/kg）尾靜脈注射小鼠造模。造模后2h時(shí)每組分別給予NS（0.3mL/只），ConODN（20mg/kg），CsA（130mg/kg），SupODN（20mg/kg）。給藥8h和24h時(shí)觀察小鼠的死亡率；采血檢測(cè)血清TNF-α、IL-4、IFN-γ含量及ALT活性。RT-PCR檢測(cè)肝組織的TNF-α、IFN-γmRNA的表達(dá)，同時(shí)觀察肝組織

10、的病理改變。 結(jié)果：SupODN與CsA組相比，死亡率明顯降低（P<0.01）。與Ns、ConODN組相比，SupODN組ALT活性和IFN-γ含量和IFN-γmRNA表達(dá)明顯降低，而IL-4含量明顯升高（P<0.01）。與NS和ConODN組相比SupODN組肝細(xì)胞壞死程度和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減輕（P<0.05）。 結(jié)論：SupODN對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷有明顯保護(hù)作用。 第三章抑制性寡脫氧核苷酸作用機(jī)

11、制的初步探 目的：初步探討抑制性寡脫氧核苷酸（suppressive oligonucleotides，Sup ODN）對(duì)刀豆球蛋白A（ConA）所致肝損保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、肝損傷模型構(gòu)造及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥同第二章。Westernblot測(cè)定脾組織中磷酸化的STAT4（phosphorylated STAT6，pSTAT4）、pSTAT6、T-bet蛋白表達(dá)，余指標(biāo)檢測(cè)同第二章。 結(jié)果：血清TNF-