NF-κB圈套寡脫氧核苷酸抑制角膜移植免疫排斥反應(yīng)的實驗研究.pdf

1、目的: 研究前房注射NF-kB圈套寡脫氧核苷酸(oligodeoxynucleotides，ODNs)對角膜移植免疫排斥反應(yīng)中的影響，并探討其在前房內(nèi)的作用機制。 方法: 1、小鼠穿透性角膜移植動物模型的建立和觀察建立三組BALB/C小鼠穿透性角膜移植動物模型，供體角膜植片來自于C57BL/6小鼠。A細(xì)：單純角膜移植組；B組：NF-kB雜碼ODNs組；C組：NF-kB圈套ODNs組。B組與c組分別在術(shù)中和術(shù)后3天

2、、5天前房注射1μg/μl NF-kB雜碼ODNs或NF-kB圈套ODNs 2μl。術(shù)后定期觀察、記錄角膜植片的各種變化。 2、角膜移植術(shù)后的免疫學(xué)和組織病理學(xué)檢測于術(shù)后3、7、14天和/或排斥等不同時間，取各組小鼠對角膜植片和虹膜睫狀體進行檢測：(1)制作虹膜睫狀體鋪片，免疫組化分析CD11c、CD80、CD86等的表達；(2)眼球冰凍切片檢測CD4<'+>T細(xì)胞的浸潤情況；(3)石蠟包埋檢測角膜植片炎癥細(xì)胞的浸潤。

3、3、 RT-PCR分析角膜移植術(shù)后虹膜睫狀體組織中趨化因子受體的表達和細(xì)胞因子的分泌于術(shù)后3、7、14天等不同時間，RT-PCR檢測各組小鼠虹膜睫狀體組織內(nèi) CCR5、CCR7、IFN-γ、IL-4和IL-12p40 mRNA的表達。 結(jié)果: 1、角膜移植術(shù)后各組免疫排斥反應(yīng)發(fā)生的平均時間單純角膜移植組、NF-kB雜碼ODNs組、NF-kB圈套ODNs組角膜移植術(shù)后發(fā)生免疫排斥反應(yīng)的平均時間分別為15.5±2.4天、13

4、.8±2.6天、22.9±4.8天，三組之間排斥反應(yīng)時間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=19.691，P=0.000)，C組角膜移植片的存活時間較其余兩組延長(P=0.000)。 2、角膜移植術(shù)后虹膜睫狀體內(nèi)DC活性標(biāo)志的變化正常虹膜睫狀體鋪片，DC的活性標(biāo)志CD11c、CD80、CD86僅微弱表達，陽性染色的細(xì)胞多分布于虹膜近瞳孔緣側(cè)。角膜移植術(shù)后A、B組虹膜睫狀體中CD11c、CD80、CD86的表達逐漸增多，至術(shù)后2周左右排斥時達高

5、峰，陽性染色的細(xì)胞在整個虹膜睫狀體中均有表達。而同期C組虹膜睫狀體中CD11c、CD80、CD86的表達較A、B組明顯減少。 3、角膜移植術(shù)后CD4<'+>T細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤和虹膜睫狀體中趨化因子受體mRNA的表達角膜移植術(shù)后A、B組植片、虹膜睫狀體中有大量炎癥細(xì)胞以及CD4陽性表達的T細(xì)胞浸潤，至術(shù)后2周左右排斥時達高峰，同時虹膜睫狀體中CCR5、CCR7等趨化因子受體mRNA的表達也相應(yīng)升高。而同期C組局部浸潤的炎癥細(xì)胞

6、以及CD4<'+>T細(xì)胞數(shù)量較少，虹膜睫狀體中CCR5、CCR7等mRNA的表達上升不明顯。 4、角膜移植術(shù)后虹膜睫狀體內(nèi)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-12p40、IL-4等mRNA的表達角膜移植術(shù)后A、B組虹膜睫狀體中IFN-γ和IL-12p40等Th1型細(xì)胞因子mRNA轉(zhuǎn)錄量升高，而Th2型細(xì)胞因子IL-4則無表達。C組各時間點IFN-γ和IL-12p40 mRNA的表達上升不明顯，而IL-4轉(zhuǎn)錄量升高。 結(jié)論: