CpG寡脫氧核苷酸對中華絨螯蟹免疫功能調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、CpG寡脫氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotides，CpG ODN)，是人工合成的能夠模擬細菌DNA的免疫刺激活性的含有CpG基序的ODN，大量研究表明，它們能激活人類、哺乳類及魚類等動物的免疫系統(tǒng)，是一類良好的非特異性免疫增強劑與特異性免疫佐劑。但是，迄今為止，尚未見有關(guān)CpG ODNs對中華絨螯蟹免疫功能影響及其作用機理的研究報道。 為探討CpG ODNs對中華絨螯蟹蟹免疫功能及抗病力的影響，進行試驗一。

2、將ODN-1670(含1個CpG基序)和ODN-R(含1個反向CpG基序，即OpC)按1、5、25μg/kg體重的劑量體腔注射中華絨螯蟹，在注射之前(Od)和注射后第1、3、5、8d采樣，同時以注射0.1mL生理鹽水組與未進行任何處理的空白組作為對照，進行一系列免疫學(xué)指標(biāo)的測定；并在第二次采樣(第3d)時，從每個處理組中取蟹6只，以1.2×10<'7>cfu/kg體重的劑量體腔注射蟹致病性嗜水氣單胞菌CL99920菌株，記錄接種7d后各

3、組蟹的累積死亡率。結(jié)果顯示，注射適量的ODN-1670能顯著地增加中華絨螯蟹的血細胞總量(THC)、透明細胞(HC)、小顆粒細胞(SGC)和顆粒細胞(GC)數(shù)量，顯著地增強血細胞的吞噬活性和呼吸爆發(fā)活性，顯著地增強血清酚氧化酶(PO)、過氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(ALP)、溶菌酶(LSZ)、溶血素(Hemocytin)及抗菌活性(Ua)(P<0.05)。此外，本試驗條件下，ODN-1

4、670還能明顯提高中華絨螯蟹對嗜水氣單胞菌的抗感染能力。與此同時，試驗劑量的ODN-R除能使血清酚氧化酶活性顯著增加(P<0.05)外，對其他免疫指標(biāo)的影響均不顯著。本試驗表明，適量的ODN-1670能增強中華絨螯蟹的免疫功能和抗病力，是適合中華絨螯蟹的新型潛在免疫增強劑，可進一步加以研發(fā)和利用。 為初步探討CpG ODN激活中華絨螯蟹血細胞酚氧化酶原(proPO)激活系統(tǒng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，進行試驗二。用適量的CpG ODN和幾種

5、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的激活劑或抑制劑處理M-199培養(yǎng)的離體中華絨螯蟹血細胞，通過檢測血細胞胞內(nèi)外酚氧化酶(PO)的增減情況，對CpG ODN觸發(fā)proPO激活系統(tǒng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑進行評價。結(jié)果表明，本次試驗所選ODN-1670與ODN-R均可觸發(fā)蟹血細胞proPO激活系統(tǒng)。兩者的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相似，有可能都包含了G-蛋白介導(dǎo)的蛋白激酶C(PKC)途徑，酪氨酸蛋白激酶(RTK)途徑對ODN-1670的觸發(fā)proPO激活系統(tǒng)的活化過程進行負調(diào)控。而依