反義寡聚脫氧核苷酸抑制腦膠質(zhì)瘤MDR1基因表達的實驗研究.pdf

1、山東大學博士學位論文反義寡聚脫氧核苷酸抑制腦膠質(zhì)瘤MDR1基因表達的實驗研究姓名：孔建新申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（神經(jīng)外科）指導教師：張慶林2002.5.16山東人學博士學位論文。R N A 的剪接的特性，可在基因水平逆轉(zhuǎn)多藥耐藥。夕7 礦目的：研究多藥耐藥基因l ( M D R I ) 反義寡聚脫氧核苷酸對膠質(zhì)瘤細胞系C 6 ／a d r 中M D R l 基因表達的作用。f 方法：以用逐漸增加阿霉素藥物濃度聯(lián)合短期暴露法建立的

2、膠質(zhì)瘤 L細胞株C 6 ／a d r 作為膠質(zhì)瘤體外耐藥模型。C 6 ／a d r 細胞培養(yǎng)于含O ．5 9 9 ／m l阿霉素的R P M I1 6 4 0 培養(yǎng)液中以維持其耐藥性。針對M D R I 基因m R N A 的A U G 起始區(qū)合成反義和相應的正義寡聚脫氧核苷酸，均經(jīng)硫代磷酸化修飾。反義寡聚脫氧核苷酸( M D R l 一A S )序列為：5 ' - C T C C A TC A CC A CC T C 一3 ’

3、，正義寡聚脫氧核苷酸( M D R 卜S ) 序列為：5 ’。G A G G T G G T G A T G G A G ．3 ’。在脂質(zhì)體L i p o f e c t i n 介導下，用M D R l 一A S 轉(zhuǎn)染C 6 ／a d r 細胞，以M D R l 一s 同樣導入細胞為對照，利用形態(tài)學觀察和噻嘩藍快速比色法( M T T 法) ，觀測M D R l 一A S 對C 6 ／a d r 細胞的毒性作用；利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應

4、( R T —P C R ) 檢測M D R l 一A S 處理后的M D R lm R N A 的表達，并以B —a c t i n 為內(nèi)參照進行定量比較；流式細胞術( F C M ) 分析P g p 的陽性細胞率。結(jié)果：觀察發(fā)現(xiàn)M D R I —A S 對C 6 ／a d r 細胞無明顯毒性作用；R T —P C R結(jié)果發(fā)現(xiàn)M D R l ·A S 處理后M D R l ／B ．a(chǎn) c t i n 由處理前的1 0 6 ％