抗2型登革病毒M蛋白和NS1蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.pdf

1、目的：利用2型登革病毒New Guinea C株(NGC株)重組質(zhì)?？寺”磉_(dá)重組M蛋白和NS1蛋白，制備抗2型登革病毒M蛋白和NS1蛋白的單克隆抗體，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了鑒定，為下一步制備快速檢測(cè)登革病毒感染的膠體金試紙條奠定基礎(chǔ)。 方法：誘導(dǎo)表達(dá)含DV2 prm、ns1基因的原核表達(dá)重組載體pET-32a(+)/prM、pET-32a(+)/M、pQE-30/NS1，并且采用了Ni2+-NTA樹脂親和層析純化重組蛋白，以SD

2、S-PAGE進(jìn)行初步鑒定，并以兔抗登革病毒免疫血清鑒定其免疫活性。以重組蛋白免疫Balb/c小鼠，采用雜交瘤技術(shù)制備抗登革病毒重組蛋白的McAb，采用間接ELISA方法和Western blot進(jìn)行McAb特異性鑒定；同時(shí)采用間接ELISA方法鑒定McAb的lg亞類、效價(jià)及親和力進(jìn)行分析。 結(jié)果：重組蛋白pET-32a(+)M、pQE-30/NS1以上清和包涵體表達(dá)，用兔抗登革病毒血清檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上清中蛋白抗原活性強(qiáng)。利用Ni2+-

3、NTA樹脂親和層析方法，從上清中純化蛋白獲得成功。通過雜交瘤技術(shù)成功獲得3株可分泌特異性McAb的雜交瘤細(xì)胞Ⅲ1.A6，Ⅲ3D2和Ⅲ4C3。其中Ⅲ1A6，Ⅲ4C3的抗體亞類均為IgG1；Ⅲ3D2的抗體亞類為IgG2a。細(xì)胞培養(yǎng)上清的效價(jià)分別為1:106， 1：105和1:106:3株單抗的親和常數(shù)均在107以上。Westerrl bolt檢測(cè)證明3株雜交瘤細(xì)胞所分泌的McAb特異性良好。 結(jié)論：成功地制備出抗M蛋白的2株McAb