熱休克蛋白70過(guò)表達(dá)對(duì)V79細(xì)胞電離輻射損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本課題通過(guò)檢測(cè)42℃，1h的熱休克處理后V79細(xì)胞中熱休克蛋白70(誘導(dǎo)型)的表達(dá)情況；觀察熱休克預(yù)處理對(duì)丫射線照射后V79細(xì)胞存活率的影響；以及熱休克預(yù)處理對(duì)γ射線照射引起的V79細(xì)胞周期阻滯的影響，研究熱休克蛋白70過(guò)表達(dá)對(duì)V79細(xì)胞電離輻射損傷的保護(hù)作用，并從細(xì)胞周期的角度探討其保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：包括三個(gè)部分： (1)對(duì)V79細(xì)胞進(jìn)行42℃，1h的熱休克處理，37℃中恢復(fù)不同時(shí)間后，采用western

2、blot法檢測(cè)熱休克處理后恢復(fù)不同時(shí)間的細(xì)胞中熱休克蛋白70的表達(dá)情況。 (2)對(duì)V79細(xì)胞進(jìn)行42℃，1h的熱休克預(yù)處理，37℃中恢復(fù)一定時(shí)間后給予不同劑量的60Coγ射線照射，克隆形成法比較熱休克處理組和未做熱休克處理的對(duì)照組細(xì)胞照射后存活率的不同。 (3)對(duì)V79細(xì)胞進(jìn)行42℃，1h的熱休克預(yù)處理，37℃中恢復(fù)一定時(shí)間后給予一定劑量的60Coγ射線照射，采用流式細(xì)胞術(shù)觀察熱休克預(yù)處理對(duì)γ射線照射引起的V79細(xì)胞周期

3、阻滯的影響。 結(jié)果： 1、Western blot顯示V79細(xì)胞經(jīng)42℃，1h的熱休克處理，37℃中恢復(fù)1h后，熱休克蛋白70(誘導(dǎo)型)即有明顯增加，4-10h達(dá)到高峰，可持續(xù)至24h，未做熱休克處理的對(duì)照組未檢測(cè)到熱休克蛋白70(誘導(dǎo)型)的表達(dá)。 2、1)照射劑量為0Gy，6Gy，8Gy時(shí)，熱休克預(yù)處理組和未做熱休克預(yù)處理的對(duì)照組細(xì)胞存活率無(wú)顯著差別；2)照射劑量為2Gy，4Gy時(shí)，熱休克處理后恢復(fù)10h組細(xì)胞

4、的存活率明顯高于未做熱休克處理的對(duì)照組，而恢復(fù)4h組與未做熱休克處理的對(duì)照組相比細(xì)胞存活率無(wú)顯著差別。 3、經(jīng)4Gyγ射線照射的V79細(xì)胞相比未經(jīng)照射的對(duì)照組G2/M期細(xì)胞比例明顯增加，而熱休克處理組相比未作熱休克處理的對(duì)照組γ射線照射后G2/M期細(xì)胞比例無(wú)顯著差別。 結(jié)論： 1、42℃，1h的熱休克處理可以有效誘導(dǎo)V79細(xì)胞熱休克蛋白70過(guò)表達(dá)。熱休克處理后恢復(fù)1h時(shí)，熱休克蛋白70即有明顯增加，4-10h達(dá)到

5、高峰，可持續(xù)至24h。 2、1)42℃，1h的熱休克處理不會(huì)對(duì)V79細(xì)胞造成損傷；2)熱休克處理后恢復(fù)10h，照射劑量小于6Gy時(shí)，熱休克預(yù)處理可以提高V79細(xì)胞電離輻射后的存活率；熱休克預(yù)處理后恢復(fù)4h不能提高V79細(xì)胞電離輻射后的存活率。提示：熱休克蛋白70過(guò)表達(dá)可以對(duì)V79細(xì)胞電離輻射損傷起到一定的保護(hù)作用。 3、電離輻射引起V79細(xì)胞G2期阻滯，42℃，1h的熱休克預(yù)處理對(duì)電離輻射引起的G2期阻滯無(wú)影響，提示熱休