熱休克蛋白70過表達(dá)對淋巴細(xì)胞輻射損傷的保護(hù)效應(yīng).pdf

1、目的：本研究課題選取HSPs家族中最為重要的HSP70為代表，研究了42℃，90min熱休克預(yù)處理后淋巴細(xì)胞中HSP70的表達(dá)規(guī)律；觀察了42℃，90min熱休克預(yù)處理對淋巴細(xì)胞存活，凋亡和hprt基因突變的影響；重點(diǎn)研究了誘導(dǎo)表達(dá)的HSP70對X射線照射引起的淋巴細(xì)胞凋亡和hprt基因突變的影響，旨在探討HSP70保護(hù)細(xì)胞，減輕輻射損傷的機(jī)理，為研究抗輻射損傷藥物和尋找提高腫瘤放射治療效果的藥物提供基礎(chǔ)性研究資料。 方法：(1

2、)采用Ficoll法分離大鼠外周血中的淋巴細(xì)胞，梳刮法制備大鼠脾臟淋巴細(xì)胞懸液；采用臺盼藍(lán)染色法，AnnexinV/PI雙標(biāo)法的流式細(xì)胞術(shù)和多核細(xì)胞法分別檢測42℃，90min熱休克預(yù)處理對大鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞的存活率，凋亡和hprt基因的影響，確定誘導(dǎo)HSP70表達(dá)的熱休克條件；同時采用流式細(xì)胞術(shù)檢測42℃，90min熱休克預(yù)處理后淋巴細(xì)胞中HSP70的表達(dá)規(guī)律，為研究HSP70的輻射防護(hù)作用做準(zhǔn)備。 (2)對大鼠外周血和

3、脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行42℃，90min熱休克預(yù)處理，于正常培養(yǎng)條件下分別恢復(fù)3h，6h和10h后，分別給予0Gy，0.5Gy，1.0Gy，1.5Gy，2.0Gy，2.5Gy，3.0Gy的X線照射，應(yīng)用AnnexinV/PI雙熒光標(biāo)記的流式細(xì)胞術(shù)檢測淋巴細(xì)胞凋亡率的變化，研究HSP70是否可以減少輻射引起的細(xì)胞凋亡。 (3)對大鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行42℃，90min熱休克預(yù)處理，于正常培養(yǎng)條件下分別恢復(fù)3h，6h和10h后，分別

4、給予0Gy，0.5Gy，1.0Gy，1.5Gy，2.0Gy，2.5Gy，3.0Gy的X線照射，采用多核細(xì)胞法檢測淋巴細(xì)胞hprt基因突變情況，研究HSP70是否可以減輕輻射引起的細(xì)胞hprt基因突變率。 結(jié)果：(1)42℃，90min的熱休克預(yù)處理對淋巴細(xì)胞的的存活率，凋亡率，和hprt基因突變率沒有影響，對淋巴細(xì)胞是一種無害刺激。 (2)淋巴細(xì)胞在42℃，90min的熱休克預(yù)處理后表達(dá)立即增高，2～4h表達(dá)最為明顯(P

5、<0.01)，隨后至少可持續(xù)表達(dá)24h。 (3)X射線照射劑量在0.5～3.0Gy時，外周血和脾臟淋巴細(xì)胞熱休克預(yù)處理后恢復(fù)培養(yǎng)6h或10h，熱休克+照射組與照射組比較淋巴細(xì)胞凋亡率差異明顯(P<0.01)，恢復(fù)培養(yǎng)3h時淋巴細(xì)胞凋亡率無差異(P>0.01)；熱休克預(yù)處理后恢復(fù)培養(yǎng)3h，6h或10h的熱休克+照射組與照射組比較淋巴細(xì)胞的壞死率無差異(P>0.01)。 (4)X射線照射劑量在0～3.0Gy時，外周血和脾臟淋

6、巴細(xì)胞熱休克預(yù)處理后恢復(fù)3h，6h或10h，X射線引起的細(xì)胞hprt基因突變在熱休克+照射組與照射組之間比較無明顯差異(P<0.01)。HSP70對外周血和脾臟淋巴細(xì)胞的hprt基因的保護(hù)效率，在0.5Gy時為70％左右，在3.0Gy時為30％左右；HSP70對hprt基因的保護(hù)效率小劑量照射時效果顯著。 結(jié)論：(1)42℃，90min的熱休克預(yù)處理對大鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞的存活，凋亡和hprt基因突變無顯著影響，即42℃，9

7、0min的熱休克預(yù)處理是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞高表達(dá)HSP70的理想條件。 (2)大鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞在42℃，90min條件下熱休克預(yù)處理后細(xì)胞中HSP70表達(dá)立即增高，2～4h表達(dá)最為明顯，隨后表達(dá)逐漸下降，24h時表達(dá)仍高于正常水平。 (3)照射劑量在0.5～3.0Gy時，大鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞接受42℃，90min的熱休克預(yù)處理，恢復(fù)培養(yǎng)6h或10h時誘導(dǎo)的HSP70可以明顯減少輻射引起的細(xì)胞凋亡，對細(xì)胞起到保護(hù)效應(yīng)