基底拉伸和壓縮加載對肝癌細(xì)胞接觸抑制喪失生長行為的影響.pdf

1、 基底拉伸和壓縮加載對肝癌細(xì)胞 接觸抑制喪失生長行為的影響 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 學(xué)生姓名： 指導(dǎo)教師： 專 業(yè)：細(xì)胞生物學(xué) 學(xué)科門類：生物工程 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 OO 八年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 肝癌細(xì)胞在體外二維培養(yǎng)中存在明顯的接觸抑制喪失現(xiàn)象，突出表現(xiàn)為細(xì)胞惡性增殖行為。細(xì)胞接觸抑制生長屬細(xì)胞

2、相互作用導(dǎo)致的社會(huì)行為，而超越單個(gè)細(xì)胞界線并把群體細(xì)胞聯(lián)系在一起的大骨架網(wǎng)絡(luò)體系，與細(xì)胞社會(huì)行為及其調(diào)控密切相關(guān)。其中，以大骨架網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)為載體的預(yù)張力對細(xì)胞生長增殖等生命活動(dòng)具有直接的調(diào)控作用。腫瘤細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)存在缺陷，由此引起的預(yù)張力調(diào)節(jié)異常與腫瘤細(xì)胞接觸抑制喪失是否則相關(guān)，本文通過力學(xué)加載手段對肝癌細(xì)胞生長基底進(jìn)行拉伸與收縮刺激，觀測細(xì)胞骨架預(yù)張力變化對細(xì)胞連結(jié)及細(xì)胞增殖的影響研究結(jié)果對揭示腫瘤細(xì)胞接觸抑制喪失成因具有一定意義。 目

3、的 通過對肝細(xì)胞與肝癌細(xì)胞 E 鈣粘素分布、 表達(dá)和運(yùn)動(dòng)生長行為與其連結(jié)狀態(tài)和骨架預(yù)張力狀態(tài)相關(guān)關(guān)系的研究，探索肝癌細(xì)胞接觸抑制喪失機(jī)制。 方法 運(yùn)用顯微形態(tài)學(xué)，圖像分析軟件，免疫熒光染色，激光共聚焦顯微成像技術(shù)等研究手段，分別對不同生長密度的肝癌細(xì)胞和肝細(xì)胞形態(tài)特征、細(xì)胞骨架變化和運(yùn)動(dòng)變形能力，以及 E 鈣粘素表達(dá)和分布變化進(jìn)行檢測和定量分析。通過細(xì)胞同步化，MTT 和流式細(xì)胞儀等實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別對機(jī)械拉伸和收縮刺激后肝癌細(xì)胞細(xì)胞骨架變化

4、和增殖進(jìn)行檢測和定量分析。 結(jié)果 1）肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞 102、104 生長密度，肝癌中 E 鈣粘素平均表達(dá)量（77.43± 5.77，76.06± 5.61）顯著高于肝細(xì)胞（15.81± 2.23，16.96± 1.12） ，p<0.05；E鈣粘素分布特征為：肝細(xì)胞 E 鈣粘素主要沿細(xì)胞膜呈散點(diǎn)狀分布，肝癌細(xì)胞中則呈彌散狀分布；兩種細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移狀態(tài)無明顯差異，均表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)速率較高、軌跡離散

5、等特征；MTT 檢測肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的生長曲線趨勢相近； 2）肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞 106 生長密度，肝癌細(xì)胞 E 鈣粘素（53.89± 3.31）表達(dá)仍高于肝細(xì)胞（28.23± 1.23），E 鈣粘素表達(dá)量在兩種細(xì)胞的不同區(qū)域存在明顯差異：肝細(xì)胞接觸區(qū)域 E 鈣粘素表達(dá)量為 28.94± 1.15，肝癌細(xì)胞接觸區(qū)域 E 鈣粘素表達(dá)量為 19.32± 7.17，p<0.05。肝細(xì)胞 E 鈣粘素分

6、布出現(xiàn)向相鄰細(xì)胞接觸面聚集，而非接觸面未見 E 鈣粘素分布，肝癌細(xì)胞 E 鈣粘素仍彌散分布于細(xì)胞表面，細(xì)胞非接觸面存在 E 鈣粘素分布；連續(xù)定點(diǎn)觀測肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力，肝細(xì)胞運(yùn)動(dòng)處于抑制狀態(tài)，肝癌細(xì)胞持續(xù)形變和運(yùn)動(dòng)，兩種細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)速率和凈遷移距離存在顯著性差異，p<0.05；兩種細(xì)胞生長變化趨勢不同，肝細(xì)胞生長曲線在達(dá)到峰值0.79 后，立刻衰減至 0.11，肝癌細(xì)胞下降幅度相對較低（0.81 到 0.29） ； 3）肝細(xì)