基底硬度對(duì)肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞融合生長行為影響的比較研究.pdf

1、目的：通過比較融合生長肝細(xì)胞(L02)與肝癌細(xì)胞(HCCLM3)對(duì)不同硬度基底(0.5 kPa、4 kPa和玻璃)的響應(yīng)情況，探查這兩類細(xì)胞融合生長差異的成因，加深對(duì)腫瘤細(xì)胞群體生長行為的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。
　　 方法：運(yùn)用實(shí)時(shí)顯微攝影技術(shù)、免疫熒光顯微觀測(cè)技術(shù)、流式細(xì)胞技術(shù)及Western Blotting等試驗(yàn)方法分別檢測(cè)L02細(xì)胞與HCCLM3細(xì)胞在不同硬度基底上的形態(tài)特征、骨架構(gòu)象、E-cad、paxillin的分布和Inte

2、grinβ1的表達(dá)，以及Src激酶活性水平的變化。
　　 結(jié)果：不同硬度基底上，L02細(xì)胞與HCCLM3細(xì)胞的融合生長行為也不同。(1)融合生長L02細(xì)胞呈圓形或立方形，HCCLM3細(xì)胞呈多角形，鋪展和極化較L02細(xì)胞更為明顯，隨基底硬度增加L02細(xì)胞圓度隨時(shí)間變化幅度較小，HCCLM3細(xì)胞變化幅度較大；加EDTA后細(xì)胞隨時(shí)間變化而變圓，圓度和鋪展面積減小，隨基底硬度增加，細(xì)胞圓度和鋪展面積增大，L02細(xì)胞較HCCLM3細(xì)胞明顯

3、；(2)融合生長的L02細(xì)胞皮質(zhì)下呈現(xiàn)環(huán)形骨架，E-cad定位于細(xì)胞-細(xì)胞連結(jié)面，與細(xì)胞骨架呈共定位分布，而HCCLM3細(xì)胞中的E-cad呈現(xiàn)彌散分布，皮質(zhì)下的骨架環(huán)不完整或者是根本形不成骨架環(huán)，胞內(nèi)細(xì)胞骨架沿著基底呈纖維狀分布；隨基底硬度增加，L02細(xì)胞骨架環(huán)越來越不明顯，HCCLM3細(xì)胞應(yīng)力纖維分布越明顯，這兩種細(xì)胞中paxill增加，HCCLM3細(xì)胞中多于L02細(xì)胞，且與骨架不呈共定位分布；(3)不同硬度基底上，E-cad、Int

4、egrinβ1和p-Src的表達(dá)量也不一樣，隨基底硬度增加L02細(xì)胞和HCCLM3細(xì)胞中的E-cad表達(dá)量顯著下降(P<0.01)，而p-Src和Integrinβ1的表達(dá)量卻顯著的增加(P<0.01)，且HCCLM3細(xì)胞較L02細(xì)胞變化更為明顯；加EDTA后L02細(xì)胞E-cad顯著增加，p-Src顯著降低，而HCCLM3細(xì)胞E-cad知p-Src無顯著性變化。
　　 結(jié)論：在二維環(huán)境中，(1)細(xì)胞的骨架構(gòu)象調(diào)整對(duì)E-鈣粘素的定